AVALIAÇÃO DO PAPEL DE BOMBAS DE EFLUXO NA RESISTÊNCIA A CLINDAMICINA E OUTROS ANTIMICROBIANOS EM CEPAS DE BACTEROIDES FRAGILIS

Renata Ferreira Boente (UFRJ); Joaquim dos Santos-filho (UFRJ); Eliane de Oliveira Ferreira (UFRJ); Geraldo Renato de Paula (UFF); Regina Maria Cavalcanti Pilotto Domingues (UFRJ)

A clindamicina é um dos antimicrobianos de escolha no tratamento de infecções causadas por anaeróbios. Porém, a problemática da resistência a este antimicrobiano, principalmente por cepas pertencentes à espécie Bacteroides fragilis, tem limitado o uso deste antimicrobiano na terapia empírica de infecções onde há suspeita do envolvimento deste grupo microbiano. O gene ermF responsável pela resistência a clindamicina na espécie muitas vezes não é detectado por PCR ou técnicas de hibridação em cepas resistentes, parecendo não estar circulante no país. Dessa forma, o objetivo deste estudo é explicar o mecanismo de resistência a clindamicina na ausência do gene de resistência ermF e de outros genes relacionados. Foi previamente descrito em B. fragilis, a presença de 16 operons homólogos ao operon MexAB-OprM de Pseudomonas aeruginosa  denominado bmeABC1-16. Com bases nesses dados foi realizada uma triagem com cepas resistentes (CIM de 8 a >256 mg/L) e sensíveis (CIM de 0,5 a 4 mg/L) através de ensaios de PCR para detecção do gene bmeB3, codificador de uma proteína transportadora do operon bmeABC3, utilizando iniciadores específicos. Dentre as 33 cepas estudadas, 88% das cepas sensíveis e 75% das resistentes apresentaram o referido gene. Apesar da presença do gene bmeB3, referido como o gene principal relacionado à resistência, ainda não foi possível elucidar seu papel na resistência a clindamicina. Uma sonda foi confeccionada a partir do gene bmeB3 da cepa de B. fragilis ATCC 25285 utilizada em ensaios de Southern Blotting para determinação do número de cópias do referido gene nessas cepas. Paralelamente, está sendo desenvolvido um protocolo de extração de RNA para ensaios de RT-PCR com intuito de verificar diferenças na expressão de bombas de efluxo em cepas positivas para o gene bmeB3 na presença e ausência de clindamicina. Em seguida, serão realizados testes fenotípicos utilizando inibidores de bombas de efluxo para determinar o envolvimento dessas bombas na resistência a clindamicina. Serão ainda selecionadas cepas para ensaios de clonagem do gene bmeB em Escherichia coli, para posterior sequênciamento e comparação das sequências apresentadas em cepas susceptíveis e resistentes para determinar a interferência da sequência gênica no perfil de susceptibilidade a clindamicina. A região upstream do operon bmeABC, referida como região reguladora do operon, de cepas sensíveis e resistentes selecionadas será analisada através da confecção de iniciadores e construção de mutantes complementares para verificar a associação entre mutações nessa região e o perfil apresentado por estas cepas. A possibilidade de associação de bombas de efluxo a resistência a clindamicina poderá auxiliar a compreensão da evolução deste fenômeno.