CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DE UMA PROTEÍNA LIGADORA A FIBRONECTINA PLASMÁTICA EM BACTEROIDES FRAGILIS

Heidi Pauer (UFRJ); Joaquim dos Santos-filho (UFRJ); Eliane de Oliveira Ferreira (UFRJ); Regina Maria Cavalcanti Pilotto Domingues (UFRJ)

 A aderência bacteriana a células e moléculas do hospedeiro é um importante processo para a colonização e sobrevivência destes micro-organismos. Bacteroides fragilis é uma bactéria Gram-negativa, anaeróbia estrita, frequentemente isolada de processos infecciosos, como infecções intra-abdominais e bacteriemias. Esta bactéria expressa diversas adesinas, sendo que algumas são capazes reconhecer componentes da matriz extracelular, inclusive a fibronectina plasmática. Uma das moléculas responsáveis por essa aderência é uma proteína de membrana externa dependente de TonB, recentemente descrita por nosso grupo. Sendo assim, o objetivo deste estudo é detectar em cepas de B. fragilis a presença do gene codificador desta proteína e iniciar sua caracterização molecular. Para realizar este estudo foram selecionadas 20 cepas de B. fragilis isoladas de quadro de bacteriemia e da microbiota normal. Inicialmente foram desenhadas sequencias iniciadoras a partir da sequencia do gene depositada em um banco de dados (EMBL/GenBank). Das cepas selecionadas foi realizada a extração de DNA pelo método de tiacianato de guanidina e a presença do gene foi detectada através da PCR. Em todas as cepas analisadas foi confirmada a presença do gene responsável pela expressão da proteína dependente de TonB. Em seguida, este gene foi clonado nos sítios das enzimas de restrição XhoI/NdeI do vetor de expressão pET26b+ para construção de uma proteína recombinante Adhesina-His-tag (Ads-6xHis). A ligação foi transformada para célula competente de E. coli DH10B para confirmação da inserção do fragmento. Para avaliarmos o envolvimento desta proteína na ligação a proteína plasmática, o pET26b+/Ads-6xHis foi trasnformado para célula de expressão da cepa de E. coli (Rosetta) para sua purificação e utilização em ensaios de adesão e inibição e produção de anticorpos policlonais. Através destes experimentos esperamos obter um melhor entendimento sobre o real papel desta proteína na interação do B. fragilis com o hospedeiro humano.