| Área: Fermentação e Biotecnologia ( Divisão J ) IDENTIFICAÇÃO MOLECULAR DE LEVEDURAS NÃO-SACCHAROMYCES CONTAMINANTES DO PROCESSO DE FERMENTAÇÃO ALCOÓLICA
Eric de Lima Silva Marques (UFAL); Karollina Siqueira Moura (UFAL); Joicy Verçosa Marques da Silva (UFAL); Bruna Talita Camilo da Silva (UFAL); Euripedes Alves da Silva Filho (UFAL)
Resumo
A produção de álcool combustível no Brasil é realizada sem esterilização prévia do mosto, sendo comum observar no processo a presença tanto de linhagens de Saccharomyces cerevisiae diferentes da que foi inoculada, quanto de leveduras de outras espécies, consideradas como leveduras selvagens. Tais leveduras podem trazer sérios problemas ao processo fermentativo, como redução no rendimento, maior tempo de fermentação, etc. Desse modo, a detecção e identificação são importantes ferramentas para o controle do processo. Ao contrário da contaminação bacteriana, que pode ser controlada com o uso de antibióticos e tratamento ácido, a contaminação por leveduras selvagens impõe a reinoculação das leveduras. As amostras de mosto fermentado foram plaqueadas em superfície do meio YPD com verde de bromocresol, antibiótico e actidiona a fim de obter colônias de leveduras não-Saccharomyces. Os morfotipos foram caracterizados e foi selecionado um exemplar de cada morfotipo para ter seu DNA extraído pelo método Fenol/clorofórmio. A identificação ocorreu por meio de PCR/RFLP da região ITS (Internal transcribed spacers) com as endonucleases de restrição Hinf I, Hae III e Hha I ou por sequenciamento do domínio divergente D1/D2 do rDNA 26S. O padrão de bandas obtidas pela restrição com as três enzimas citadas foi comparado com banco de dados de ITS. Os isolados apresentaram diferentes produtos de PCR dessa região, variando entre 400 e 1050 pb. Após a restrição enzimática, observou-se 15 perfis diferentes, destas, 10 espécies (Trichosporon beigeli, Pichia delftensis, Schizosaccharomyces pombe var. pombe 1, P. caribbica, P. guilliermondi, P. membranefaciens, Candida rugosa, T. asahii, Zigoascus hellenicus e Zygosaccharomyces fermentati) foram identificadas por PCR/RFLP e 05 perfis não puderam ser identificadas por essa técnica, sendo submetidas ao sequenciamento do Domínio D1/D2 resultando nas espécies Rhodotorula mucilaginosa, C. tropicalis, Kluyveromyces marxianus, Schizosaccharomyces pombe var. pombe 2, C. auriginensis. Os resultados demonstram que a contaminação por leveduras nas usinas de álcool combustível em Alagoas apresenta uma grande diversidade de leveduras competindo com o inoculo, o que pode resultar em quedas de rendimento do processo fermentativo.
Palavras-chave: Caracterização genética, Domínio D1/D2, Fermentação alcoólica, Contaminantes microbianos, PCR/RFLP |