ATIVIDADE CITOTÓXICA PRODUZIDA POR CIANOBACTÉRIAS DO GÊNERO LEPTOLYNGBYA  SP.

Fernanda Büchli (UNICAMP); Sandra Soares Martins (UNICAMP); Astolfi Gabriel de Jesus (UNICAMP); Robert Alvin Bernedo Navarro (UNICAMP); Célia Leite Sant'anna (Sec Meio Ambiente); Tomomasa Yano (UNICAMP)

Cianobactérias são eubactérias autotróficas, fotossintetizantes, que produzem uma grande diversidade de metabólitos secundários, entre eles cianotoxinas, as quais colocam em risco a saúde ambiental, animal e humana. Na classificação taxonômica das cianobactérias, o gênero Leptolyngbya encontra-se na ordem Oscillatoriales, família Pseudanabaenaceae. Neste estudo, a amotra do gênero Leptolyngbya coletada na Mata Atlântica, na foz do rio Perequê-Açú, no município de Paraty, RJ, foi analisada quanto à produção de citotoxinas. A amostra de água salobra foi coletada a 20 cm de profundidade em superfície aquática sem floração.  Leptolyngbya sp foi cultivada a partir da inoculação de um tricoma isolado em microscópio óptico, e transferido para 20 mL de meio BG11 com 50 μg/mL de ciclohexamida, com período de incubação de 30 dias, à temperatura de 30°C e fotoperíodo de 12 horas. Para a produção de toxinas, o isolado (100 ml) foi transferido para 10 litros de meio ASM-1, e cultivado sob estresse luminoso e temperatura de 27°C por 15 dias, sob aeração e sem ciclohexamida. As células bacterianas foram precipitadas por centrifugação, e ressuspendidas em água deionizada, e submetidas a congelamento a -80°C e descongelamento abrupto, por 3 vezes. Foram então submetidas a ultra-som por 3 ciclos de 20 segundos (pulsos de 45%). O sobrenadante foi obtido por centrifugação a 12.000 xg, seguido de separação em frações de diferentes pesos moleculares utilizando membranas de ultra-filtração (Amicon, Millipore). As frações obtidas foram filtradas com Millex. Para verificar a atividade citotóxica os filtrados foram aplicados em quadruplicata em cultura de células Vero (células de rim de macaco verde africano) contendo 9 x 10³ células por cavidade, em volume de 100 μL por cavidade. A fração de peso molecular entre 50 e 300 kDa apresentou efeito citotóxico após cinco horas de aplicação sobre as culturas de células, provocando alteração morfológica, condensação nuclear, vacuolização, perda de junção celular, seguido de perda de adesão celular após 14 horas. Estas alterações morfológicas indicam o potencial citotoxigênico deste isolado. Não há na literatura a descrição da produção da atividade citotóxica deste gênero de cianobactéria. A caracterização da cianotoxina produzida por Leptolyngbya sp auxiliará no entendimento da ação citotóxica desta espécie em humanos e seu papel na saúde ambiental.