CAMPYLOBACTER FETUS SUBSP. VENEREALIS INDUZ EXPRESSÃO DE MRNA PARA INTERLEUCINA 8 VIA TOLL-LIKE RECEPTOR 2 E TOLL-LIKE RECEPTOR 5.

Telma Maria Alves (UFMG/EV); Monalisa Sousa Moura Souto (UFMG/EV); Andrey Pereira Lage (UFMG/EV)

Campylobacter fetus subsp. venerealis (Cfv) é uma bactéria que coloniza o trato genital de bovinos Causando  problemas reprodutivos, a campilobacteriose genital bovina. A resposta imune inata é a primeira linha de defesa dos hospedeiros contra patógenos invasores, pois reconhece moldes moleculares associados à patógenos–PAMP’s. Um dos mecanismos de reconhecimento desses PAMP’s são receptores semelhantes ao Toll (Toll-like receptors-TLRs). O processo de inflamação causado por microrganismos após sua ligação com a célula, envolve a liberação de fatores quimiotáticos. O objetivo deste estudo foi a investigação da participação de TLRs no reconhecimento de PAMP’s de Cfv e na consequente indução de secreção de IL-8 em resposta à infecção de células epiteliais. Cfv NCTC10354 foi inoculada em novilha virgem, no estro, por via vaginal. Sete dias após a inoculação, foi isolada do muco cervical (MC) a amostra P1, que foi utilizada para infecção de outra novilha. Após nove dias de infecção foi isolada do útero deste animal infectado a amostra P2, que foi inoculada intravaginalmente em novilha. A amostra P3, derivada da Cfv NCTC10354 após passagem em duas novilhas virgens reisolada do MC da terceira novilha 14 dias após a infecção, foi utilizada para os experimentos. Foi utilizada a linhagem celular MDBK (ATCC CCL-22) em uma concentração de 4x10⁵ cel/mL em placas de 6 poços, multiplicidade de infecção de 500 bact/cel, incubadas por 1, 2, 6 e 12 h. mRNA foi extraído pelo método do Trizol e estocado a -80°C. A partir do cDNA confeccionado foi realizado a qRT-PCR em tempo real utilizando iniciadores específicos para GAPDH, IL-8, TLR2, 4 e 5. O acúmulo de mRNA para IL-8 em células MDBK infectadas com Cfv iniciou-se a partir de 2h de incubação, tendo um aumento significante às 6h e, mantendo-se às 12h. A expressão de mRNA para TLR5 apresentou-se alta 1h após a infecção, caindo às 2h e aumentando novamente entre 6 e 12h. A expressão de mRNA para TLR2 iniciou-se em 12h e, em conjunto com TLR5, coincide com a maior expressão de mRNA para IL-8. A expressão de mRNA para TLR4 iniciou-se em níveis baixos às 2h e se manteve inalterado até às 12h. Estes resultados indicam que a expressão de mRNA para IL-8 em células epiteliais após a infecção por Cfv é dependente da expressão de mRNA para TLR2 e TLR5.Agradecimentos: Fapemig, Capes, CNPq, FEP MVZ Coordenação Preventiva.