CINÉTICA DE ADERÊNCIA E ACÚMULO DE MRNA PARA IL-8 EM CÉLULAS HELA INFECTADAS POR CAMPYLOBACTER FETUS SUBSP. VENEREALIS SEQUENCIALMENTE INOCULADAS E REISOLADAS DE NOVILHAS VIREGENS.

Ana Paula Reinato Stynen (UFMG); Telma Maria Alves (UFMG); Juliana Pinto da Silva Mol (UFMG); Ana Claudia Pinto Cottorello (MAPA/Lanagro MG); Andrey Pereira Lage (MAPA/Lanagro MG)

infecção do trato genital de fêmeas bovinas pelo C. fetus subsp. venerealis (Cfv) resulta em endometrite que cria um ambiente desfavorável à implantação e ao desenvolvimento do embrião. Um dos primeiros passos para o estabelecimento de uma infecção é a ligação do microrganismo à célula do hospedeiro que inicia os processos de sinalização celular, desencadeando a resposta imune do hospedeiro. Os objetivos deste estudo foram avaliar a cinética de aderência e o acúmulo de mRNA para IL-8 em células HeLa infectadas por Cfv sequencialmente inoculadas e reisoladas de novilhas virgens. Cfv NCTC10354 foi inoculada em novilha virgem, no estro, por via vaginal. Sete dias após a inoculação, foi isolada do muco cervical a amostra P1, que foi utilizada como desafio para infecção vaginal de outra novilha. Após nove dias de infecção foi isolada do útero deste animal a amostra P2, que foi inoculada intravaginalmente em novilha. A amostra P3 foi isolada do muco cervical da terceira novilha 14 dias após a infecção. Para o ensaio de aderência foi realizado o protocolo de gentamicina, utilizando células HeLa (2,2x10⁵ células) em placas de 48 poços e para cinética de IL-8 foram utilizadas placas de 6 poços (1,2x10⁶ células).  As células HeLa  foram inoculadas com suspensões de Cfv NCTC10354, P2 e P3, na multiplicidade de infecção de 500 bactérias/célula, e incubadas por 30 min, 2h, 8h, 12h e 18h para IL-8 e  30, 60, 90, 120, 150 e 180 min para ensaio de aderência. Após a incubação foi realizada a extração de mRNA e confecção do cDNA. A determinação dos níveis de acúmulo de mRNA para IL-8 foi realizada por qRT–PCR em tempo real. Os resultados foram analisados quantitativamente após normalização baseada na expressão de GAPDH. A percentagem de aderência de cada amostra foi calculada utilizando as contagens bacterianas do inóculo e dos poços sem gentamicina. A variação do acúmulo de mRNA para IL-8 em células HeLa infectadas com as amostras Cfv NCTC10354, P2 e P3 mostra o mesmo padrão com expressão a partir dos 30 min e pico às 12h. Entretanto, o acúmulo de mRNA IL-8 na amostra P3 foi desde o início significativamente superior ao encontrado nas células infectadas pela amostra Cfv NCTC10354. As amostras mostraram uma cinética de aderência semelhante já aos 30 min e a amostra P3, apresentou valores percentuais de aderência superiores à amostra NCTC10354 na maioria dos tempos testados.