IDENTIFICAÇÃO DE GENES DE BURKHOLDERIA SP. ASSOCIADOS AO CONTROLE BIOLÓGICO DE PECTOBACTERIUM CAROTOVORA

Emy Tiyo Mano (USP); Aline Aparecida Camargo Neves (UMC); Welington Luiz Araújo (UMC)

A bactéria Pectobacterium carotovora é responsável por causar danos a diferentes hospedeiros, sendo o mecanismo central de sua patogênese, a produção de enzimas pectinolíticas, que degradam pectatos de cálcio da lamela média junto à parede celular, causando extravasamento do conteúdo celular e, conseqüentemente, a podridão-mole. Em orquídeas, as lesões ocorrem inicialmente nas folhas, sob a forma de encharcamento dos tecidos, e ao atingirem o pseudocaule causam a morte da planta. Sua entrada na planta pode ocorrer por meio de ferimentos ou aberturas naturais, permanecendo nos espaços intercelulares ou na parede fina dos tecidos parenquimáticos. Patógeno oportunista, sua virulência é dependente das interações com seu hospedeiro e outros microrganismos ocupando o mesmo nicho, além da interação com o ambiente. Resultados recentes mostram que bactérias endofíticas do gênero Burkholderia podem controlar a podridão mole em orquídeas, e já foi observado em Oncidium que a aplicação desta bactéria endofítica reduziu em até 100% os sintomas da podridão mole. Entretanto, os aspectos moleculares envolvidos neste controle ainda não foram estudados. Dessa forma, o objetivo deste trabalho é a identificação e clonagem de genes da bactéria endofítica Burkholderia associados ao controle de Pectobacterium carotovora em orquídeas.  Inicialmente foram testados 40 isolados de Burkholderia sp., de colmo, raiz e rizosfera de cana-de-açúcar para o controle de P. carotovora. Destes, 65% apresentaram capacidade de inibir os sintomas da podridão mole em fragmentos foliares de Oncidium. Dentre estes, o isolado endofítico de raízes 115R-B8 foi selecionado para a geração de mutantes por meio da inserção aleatória do transposon Tn5. Foram obtidos 1788 mutantes, destes, 377 já foram caracterizados quanto à capacidade de inibir a podridão mole causada por P. carotovora, tendo sido observado 35 mutantes com o padrão de inibição alterado em relação à linhagem selvagem, tendo alguns apresentado perda parcial ou total na capacidade de controle da doença. Além disso, também foram observadas diferenças no tempo de crescimento destes mutantes em meio TSA 5% kan [200μg/ml] e na pigmentação das colônias, o que permite inferir que diferentes classes de mutações podem resultar na perda da capacidade de controle da doença, e que este trata-se de um complexo mecanismo no qual mais de um gene pode estar envolvido.