| Área: Genética e Biologia Molecular ( Divisão N ) AVALIAÇÃO DO EFEITO DO CALDO DE CANA-DE-AÇÚCAR NO PERFIL DE EXPRESSÃO GÊNICA DA BACTÉRIA GLUCONACETOBACTER DIAZOTROPHICUS
Péricles de Souza Galisa (CNPAB); Gabriela Alves (CNPAB); Vivianne Ferreira (CNPAB); Túlio Gonçalo (CNPAB); Jean Simões Araújo (CNPAB); José Baldani (CNPAB); Marcia Vidal (CNPAB)
ResumoGluconacetobacter diazotrophicus é um microrganismo adaptado ao habitat endofítico e é uma das bactérias responsável pela fixação biológica do nitrogênio (N2) em diversas culturas de grande importância agrícola, como a cana-de-açúcar, o café, e a batata doce. Neste trabalho foi investigado o perfil de expressão gênica de G. diazotrophicus (estirpe PAL5) em resposta ao caldo de cana-de-açúcar com o objetivo de identificar genes relacionados com a sinalização bactéria-planta. Foi extraído RNA total de G. diazotrophicus cultivada em meio LGI suplementado com 50% de caldo de cana ou apenas em caldo de cana esterilizado por filtração e como controle, a bactéria foi cultivada em meio LGI suplementado com açúcar cristal e, posteriormente, utilizado na síntese de cDNA. Este foi empregado para a obtenção dos Fragmentos Derivados de Transcritos (FDTs) pela técnica de cDNA-AFLP. Tais FDTs foram amplificados por PCR, imobilizados em membrana de náilon e utilizados para hibridização com cDNA marcado obtidos de G. diazotrophicus cultivada nas mesmas condições. Para a síntese do cDNA marcado com 32P foi utilizado RNA total extraído de G. diazotrophicus cultivada em meio LGI suplementado com 50% de caldo de cana-de-açúcar ou apenas em caldo de cana esterilizado por filtração. Os cDNAs foram sintetizados através da reação de transcriptase reversa utilizando o kit “SuperScriptTm First-Strand Synthesis System for RT-PCR” (Invitrogen Life Technologies) empregando iniciadores randômicos e 32PdCTP. Para cada tratamento foram utilizadas 2 membranas contendo 173 FDTs. O sequenciamento dos FDTs empregados no Northern reverso, revelou que as seqüências analisadas apresentaram similaridade com genes envolvidos em diferentes processos metabólicos. Dentre os genes diferencialmente expressos foi observado homologia com chaperonas CsaA relacionadas com exportação, proteína multi-extrusão antimicrobiana, proteínas de domínio beta lactamase, proteína tipo Mu, fosfosulfato redutase, dehidrogenase/redutase de cadeia curta SDR, proteínas de domínio rhodanase, entre outros. Uma análise mais detalhada do padrão de expressão destes genes, utilizando uma abordagem quantitativa, ainda precisa ser realizada para um maior entendimento da importância relativa dos mesmos na interação bactéria-planta.
Palavras-chave: Cana-de-açúcar, Endofíticos, Expressão gênica, Gluconacetobacter diazotrophicus |