MORFOLOGIA CELULAR DE SALMONELLA ENTERICA SOROVAR ENTERITIDIS NO ESTADO VIÁVEL NÃO CULTIVÁVEL (VNC) POR MEIO DE MICROSCOPIA DE FORÇA ATÔMICA

Camila Pinheiro do Carmo (UFV); Miriam Teresinha dos Santos (UFV); Walason da Silva Abjaude (UFV)

Salmonella é um importante causador de doenças de origem alimentar em humanos e é capaz de entrar no estado fisiológico denominado viável não cultivável (VNC). Nesse estado, as células permanecem metabolicamente ativas, porém não conseguem crescer em meios de cultura utilizados rotineiramente em laboratório. Células no estado VNC apresentam alterações morfológicas, como redução de tamanho e transição da forma bacilar para a forma cocóide. Essas mudanças morfológicas fazem parte da estratégia de sobrevivência e são resultados da contração citoplasmática e da redução do volume periplasmático, pois visam minimizar as necessidades da célula por nutrientes. A microscopia de força atômica (AFM) vem sendo utilizada como uma excelente ferramenta, pois permite maior resolução da superfície celular, gerando imagens tridimensionais com riqueza de detalhes e requer um preparo simples da amostra. O objetivo desse trabalho foi avaliar as alterações morfológicas de Salmonella enterica sorovar Enteritidis no estado VNC por meio da AFM. Foi utilizada a estirpe S. Enteritidis PT4 963 em quatro condições, fase logarítmica, fase estacionária, estresse nutricional (starvation) e estado VNC. Para a obtenção de células na fase log e estacionária, a estirpe foi cultivada em caldo Infusão de Cérebro e Coração (BHI) a 37°C até alcançar a densidade óptica (D.O.) de 0,3 e até a D.O. de 0,8, respectivamente. Células em resposta a estresse nutricional foram obtidas após inoculação em solução fosfato de Butterfield - BPS (KH₂PO₄ 7,35 mmol/L) e incubadas a 37°C por 5 dias. Células no estado VNC foram obtidas após inoculação em solução BPS acrescida de 1,2 mol/L de NaCL e incubadas por 70 dias a 4°C. Foram realizadas preparações microscópicas na forma de esfregaço em lâmina de vidro de 1 cm² a partir das suspensões das células de cada uma das condições e observadas ao microscópio de força atômica. As células no estado VNC e starvation apresentaram menor rugosidade na superfície do envoltório celular se comparadas às fases log e estacionária. A forma bacilar foi observada nas fases log e estacionária, entretanto as células em starvation e no estado VNC apresentaram transição para a forma cocóide. Ao contrário do que já foi descrito na literatura, não foi observada a redução do tamanho celular na starvation (aproximadamente 1,0 μm) e no estado VNC (aproximadamente 1,6 μm) comparado  aos controles, log (1,2 μm) e estacionária (aproximadamente 1,2 μm) . Células no estado VNC Salmonella enterica sorovar Enteritidis PT4 963 apresenta forma cocóide e tamanho celular semelhante ao das células em fase exponencial de crescimento.