INTERFERÊNCIA DE CONCENTRAÇÃO SUB-INIBITÓRIA DE CLINDAMICINA NO CRESCIMENTO DE CEPA HIPERVIRULENTA DE CLOSTRIDIUM DIFFICILE

Danielle Angst Secco (UFRJ); Ilana Teruszkin Balassiano (UFRJ); Livia Queiroz Ferreira (UFRJ); Rafael José Marques Peixoto (UFRJ); Joaquim dos Santos Filho (UFRJ); Geraldo Renato de Paula (UFF); Regina Maria Cavalcanti Pilotto Domingues (UFRJ)

Clostridium difficile é um bacilo gram-positivo, anaeróbio, formador de esporo, freqüentemente associado aos casos de diarréia nosocomial, colite pseudomembranosa e megacólon tóxico. A aquisição de C. difficile ocorre primariamente no ambiente hospitalar, na sua forma esporulada, sendo o estabelecimento e a multiplicação no cólon resultado da supressão de membros da microbiota anfibiôntica durante ou após a antibioticoterapia. Os antimicrobianos normalmente envolvidos são os de amplo espectro, como clindamicina, cefalosporinas e penicilinas. Os esporos de C. difficile são capazes de sobreviver por longos períodos no ambiente, e ao encontrarem condições adequadas no cólon iniciam o processo de germinação. Os principais fatores de virulência associados a cepas patogênicas de C. difficile são as toxinas A (enterotoxina) e B (citotoxina). Recentemente foi descrita a existência da cepa hipervirulenta NAP-1, que apresenta as seguintes características: superexpressão dos genes que codificam as toxinas A e B, devido a deleções no gene que regula negativamente a expressão destas toxinas; produção da toxina binária, cujo papel ainda é incerto no processo infeccioso; e elevados níveis de resistência a antimicrobianos. O trabalho teve como objetivo evidenciar alterações no crescimento da cepa hipervirulenta NAP-1 quando exposta a concentrações sub-inibitórias de Clindamicina. Foi realizada a curva de crescimento com esta cepa, cultivada em caldo Brucella contendo ou não Clindamicina em concentração sub-inibitória (1/2 MIC, 4mg/L).  O crescimento foi mensurado através de contagem de colônias em placa pela técnica de gotas, na qual as culturas foram submetidas a diluições seriadas em caldo Brucella em cada ponto da curva, e gotas de 10 µL de cada diluição foram transferidas para placas de agar sangue suplementado, e incubadas em anaerobiose por 48h. Nas primeiras 4h o comportamento das culturas com e sem antibiótico foi semelhante. Com 8h a cultura sem antibiótico sofreu aumento de aproximadamente 2 logs, enquanto a sem antimicrobiano permaneceu constante. A partir desse ponto, ambas as culturas passaram a apresentar uma redução no crescimento até o ponto 24h. 48h após a incubação, a cultura sem antibiótico permaneceu em decréscimo, enquanto a cultura com ½ MIC sofreu um aumento de aproximadamente 2 logs. Já foi previamente descrita a interferência da presença de antibióticos em concentrações sub-inibitórias no aumento da expressão de toxinas, e pode-se inferir que o aumento do crescimento observado no ponto 48h poderia estar relacionado a um aumento da capacidade de esporulação da bactéria. A interferência da presença de antibióticos na expressão de genes associados a esporulação de C. difficile será objeto de futuras investigações.