TOLERÂNCIA DE ESTIRPES DE BACTÉRIAS NODULÍFERAS EM LEGUMINOSAS DO GÊNERO CUPRIAVIDUS À SALINIDADE E A DIFERENTES VALORES DE PH

Paula Marcela Duque Jaramillo (UFLA); Karina Barroso da Silva (UFLA); Ligiane Aparecida Florentino (UFLA); Fatima Maria de Souza Moreira (UFLA)

A fixação simbiótica de N2 foi recentemente relatada para uma espécie do gênero Cupriavidus (Cupriavidus taiwanensis). Espécies de Cupriavidus sp. foram isoladas de nódulos das planta-iscas Phaseolus vulgaris e Leucaena leucocephala quando inoculadas com amostras de solos coletadas próximas do sistema radicular da leguminosa Sesbania virgata, no Sul de Minas Gerais. Nesse trabalho, foram estudadas 22 dessas estirpes de Cupriavidus sp. e a estirpe tipo de Cupriavidus taiwanensis, LMG 19424T, isolada de nódulos de Mimosa pudica em Taiwan. Estas 23 estirpes foram avaliadas quanto à tolerância à salinidade e a diferentes valores de pH. O teste foi realizado em placas contendo meio 79 modificado com as condições de estresse citadas acima. Antes da exposição das estirpes a essas condições, estas foram cultivadas em meio 79 líquido sob agitação a 120 rpm por 72 h. Após esse período, procedeu-se a lavagem das células com solução salina (0,85%). Alíquotas de um 1,0 mL de cada cultura bacteriana contendo 109 células foram transferidas para microtubos esterilizados e foram centrifugadas a 10.000 rpm, a 4°C por 10 minutos. O sobrenadante foi descartado e as células foram ressuspensas em 1,0 mL de solução salina (0,85%) estéril e recentrifugadas. O processo de descarte do sobrenadante, ressuspensão das células e centrifugação foi repetido por três vezes. Ás diferentes concentrações salinas, alíquotas de 0,1mL dessas suspensões de bactérias foram inoculadas e espalhadas com alça de Drigalsky em meio de cultura 79 sólido, contendo NaCl nas seguintes concentrações: 0; 5; 10; 15; 20; 25 e 30g L-1. O teste foi feito em triplicata. Para avaliar a tolerância das bactérias ás diferentes concentrações foi observada a presença ou ausência de crescimento no meio após 72 h de incubação a 28°C. Foram testados os seguintes valores de pH: 4,0; 5,0; 6,0; 7,0; 8,0; 9,0. Para as etapas de inoculação, tempo de incubação e avaliação do crescimento das bactérias nos meios contendo os diferentes valores de pH, seguiu-se o mesmo procedimento adotado no teste de tolerância a salinidade. Foi observado crescimento de todas as estirpes em todos os valores de pH. Em relação à salinidade, as estirpes de Cupriavidus sp. apresentaram comportamento variável, sendo de um modo geral, menos tolerantes que a estirpe LMG 19424T. Fomento: CAPES, CNPq, FAPEMIG e BiosBrasil.