CARACTERIZAÇÃO DE PROTEÍNAS SECRETADAS DE CORYNEBACTERIUM PSEUDOTUBERCULOSIS PARA O DIAGNÓSTICO DA LINFADENITE CASEOSA EM PEQUENOS RUMINANTES

Núbia Seyffert (UFMG); Luis Gustavo Carvalho Pacheco (UFMG); Wanderson Marques da Silva (UFMG); Leonardo Mendes Castro Alves (UFMG); Agenor Valadares Santos (UFMG); Maira Ribeiro Rodrigues (UFMG); Thiago Luiz de Paula Castro (UFMG); Adriano Monteiro de Castro Pimenta (UFMG); Anderson Miyoshi (UFMG); Vasco Azevedo (UFMG)

A linfadenite caseosa (LC) é uma enfermidade crônica de ampla distribuição mundial causada por Corynebacterium pseudotuberculosis (CP). Esta doença acomete caprinos e ovinos, sendo caracterizada pela formação de abscessos em nódulos linfáticos superficiais e/ou órgãos internos, o que gera perdas econômicas significativas relacionadas à produtividade dos animais. Vários testes diagnósticos foram desenvolvidos, porém a maioria não apresenta acurácia suficiente, custo reduzido e rapidez na obtenção dos resultados, o que é indispensável no caso da LC. Estudos recentes demonstraram que as proteínas secretadas de CP induzem uma elevada produção de interferon gama em animais infectados, fato importante pela prevalência de uma resposta imune celular no início da infecção. Neste contexto, geramos um mapa proteômico de todas as proteínas secretadas por uma linhagem de CP isolada de caprinos a fim de identificar e caracterizar novos alvos para elaboração de um diagnóstico eficiente. Assim, foram realizadas extrações de proteínas secretadas em meio quimicamente definido, através da técnica de fracionamento em três fases. Após, as proteínas obtidas foram resolvidas em géis bi-dimensionais (2D-PAGE) e transferidas para membranas de nitrocelulose para teste com soros de animais experimentalmente infectados e não infectados com CP, através da técnica de Western blot. Seis spots apresentaram reatividade com os soros de animais infectados com CP e esses mesmos 6 spots não reagiram com soros de animais não infectados com CP. Os spots imunogênicos foram excisados do gel, digeridos com tripsina e analisados por espectrometria de massa (MALDI-TOF MS/MS). As massas moleculares dos peptideos tripticos provenientes dos spots foram analisadas através do programa X!Tandem com o banco de dados de aminoácidos preditos de CP. As seis proteínas identificadas estão sendo submetidas à clonagem molecular para a obtenção das proteínas recombinantes, que posteriormente serão testadas quanto à antigenicidade e imunogenicidade. Os resultados preliminares in vitro e in silico são promissores para a utilização dessas proteínas em um diagnóstico sensível e específico, o que contribuirá para a erradicação da LC dos rebanhos.
Suporte financeiro: CAPES, CNPq, MCT-FINEP e FAPEMIG