| Área: Micobacteriologa ( Divisão C ) ANÁLISE DA FORMAÇÃO DE BIOFILME E DETECÇÃO DE GENES RELACIONADOS COM A MULTIRRESISTÊNCIA EM MYCOBACTERIUM SPP.
Livia Cardoso Barroso (UFRJ); Marlei Gomes da Silva (UFRJ); Fernanda C. de Queiroz Mello (UFRJ); Rafael Silva Duarte (UFRJ); Marinella Silva Laport (UFRJ)
ResumoO regulador transcricional MarA (operon mar) está envolvido com a resistência múltipla a antibióticos e com a virulência em bactérias como Escherichia coli. Em Mycobacterium smegmatis foi descrito um sistema regulador semelhante. Foi proposto que a presença da camada externa rica em ácidos micólicos contribuiria para a hidrofobicidade de micobactérias não tuberculosas, impermeabilidade e crescimento lento, o que facilitaria a aerosolização, adesão em superfícies, formação de biofilme e a resistência a antibióticos. Devido a existência de fontes ambientais desses micro-organismos, estudos sobre biofilme e detecção de genes de multirresitência entre essas bactérias oportunistas são de alta relevância. Este estudo teve como objetivos analisar a produção de biofilme e detectar genes de multirresistência em estirpes de Mycobacterium spp. Foram analisadas 16 estirpes de micobactérias de crescimento rápido (MCR): M. fortuitum (5), M. massiliense (4), M. abscessus (3), M. chelonae (2) e M. bolletii (2). Para análise da formação de biofilme foi realizado o método de semi-quantificação da aderência em poliestireno. Os genomas das estirpes M. tuberculosis H37Rv e M. smegmatis ATCC 14468 foram utilizados como fonte de dados para análises de bioinformática. Os genes que apresentavam maior homologia com genes do operon mar foram utilizados para o desenho de iniciadores para a detecção de genes de multirresistência. Essas estirpes também foram utilizadas como controles-positivos na padronização das reações de PCR. De acordo com a análise da quantificação da produção de biofilme pelas estirpes de MCR, 5 (23,8%) foram fortemente produtoras, 5 (23,8%) foram consideradas não-produtoras, 4 (19,1%) foram fracamente produtoras e 2 (9,5%) apresentaram produção moderada. Após as análises de bioinformática, as sequências dos genes araC de M. tuberculosis H37Rv e M. smegmatis ATCC 14468 foram selecionadas para o desenho de dois pares de iniciadores. Dois protocolos foram utilizados para as estirpes controles e de MCR. A reação de PCR mais adequada foi selecionada e o produto de 500 pb foi detectado. Assim, os amplicons de cada espécie serão purificados e sequenciados. As sequências obtidas serão analisadas no banco de dados de genes a fim de se confirmar a detecção do gene araC e associá-lo com a multirresistência nas estirpes analisadas.
Palavras-chave: araC, biofilme, multirresistência, Mycobacterium spp. |