PREVALÊNCIA E EFEITO CITOTÓXICO DE EXOU EM ISOLADOS CLÍNICOS DE PSEUDOMONAS AERUGINOSA

João Paulo de Souza Rosas (UERJ); Carolina Diettrich Mallet de Lima (UERJ); Carlos Roberto Fernandes (UERJ); Maria Cristina de Assis (UERJ); Lucimar Gonçalves Milagres (UERJ); Alessandra Mattos Saliba (UERJ)

Pseudomonas aeruginosa é um patógeno oportunista capaz de invadir a corrente sanguínea e causar sepse fatal. A porta de entrada do microrganismo interfere no desenvolvimento da bacteremia e infecções iniciadas no trato respiratório são associadas a mau prognóstico. Entre os inúmeros fatores de virulência de P. aeruginosa, destaca-se ExoU, uma citotoxina com atividade tipo fosfolipase A₂ que é injetada no citossol de células hospedeiras via sistema de secreção do tipo III. A secreção de ExoU por P. aeruginosa foi associada ao óbito de camundongos infectados e à morte de células de mamíferos em diversos modelos de interação in vitro. O significado clínico destes achados foi confirmado por estudos posteriores que relacionaram a virulência de isolados de P. aeruginosa obtidos de pacientes com pneumonia e sepse à síntese desta toxina. Em adição, a secreção de ExoU é mais freqüentemente observada em amostras isoladas de sangue, sugerindo um possível papel desta proteína no estabelecimento de infecções invasivas. No presente estudo, a prevalência do gene exoU e o potencial citotóxico deste fator de virulência foram pesquisados em 49 isolados de P. aeruginosa obtidos de pacientes com bacteremia atendidos no Hospital Universitário Pedro Ernesto, no Rio de Janeiro. A presença do gene exoU foi avaliada por PCR seguida de sequenciamento dos fragmentos amplificados. Os isolados exoU+ foram analisados por RAPD para a identificação de clones e a produção de ExoU foi pesquisada por Western blot. A citotoxicidade destes isolados foi avaliada em culturas de células epiteliais respiratórias BEAS-2B pelo teste da redução do MTT. Nestes ensaios, a atividade tipo fosfolipase A₂ de ExoU foi inibida pelo tratamento das bactérias com metil araquidonil fluorofosfonato (MAFP). O gene exoU foi detectado em 10 isolados de sangue de 8 clones distintos e a produção da proteína ExoU, in vitro, foi observada em 7 amostras. Todos os isolados exoU+ foram citotóxicos para culturas de BEAS-2B e o tratamento com MAFP levou a um aumento significativo da viabilidade celular. Em conjunto, estes resultados sugerem que o gene exoU, presente em 20,4% dos isolados de sangue, pode ser associado à morte de células epiteliais respiratórias e contribuir para a disseminação bacteriana pela corrente sanguínea do hospedeiro.