EFEITOS DA SUBUNIDADE B RECOMBINANTE DE C-FICOCIANINA EM CÉLULAS HEP-2

Tatiane Marques Porangaba (Instituto Butantan); Maurílio Fernandes dos Santos (Instituto Butantan); Roxane Maria Fontes Piazza (Instituto Butantan); Marcelo Palma Sircili (Instituto Butantan)

C-ficocianina (C-PC), pigmento solúvel em água, é encontrada em algumas cianobactérias como, por exemplo, Arthrospira platensis, a qual é muito utilizada na dieta alimentar em muitos países. Este pigmento é constituído por duas subunidades, α e β, com massas moleculares de 16 e 17kDa, respectivamente. Recentemente foi demonstrado que a subunidade β da C-PC de Anabaena tem atividade anti-tumoral, pois é capaz de promover apoptose em células cancerígenas e inibir a proliferação celular. O objetivo deste estudo foi clonar e expressar a subunidade β de C-PC de A. platensis em amostras de Escherichia coli e verificar se a proteína recombinante é capaz de induzir apoptose em células da linhagem HEp-2.  A subunidade β foi clonada no vetor pGEM-T Easy, originando o plasmídio pTMP-01, e em seguida subclonada no vetor pET28a, originando o plamídio pTMP-02. Quando as células transformadas com o plasmídio pTMP-02 atingiram o crescimento de D.O. entre 0,5 e 0,6, estas foram induzidas com 1mM de IPTG durante 4 h. A transcrição do gene foi confirmada por RT-PCR e immunoblotting. As proteínas recombinantes foram purificadas em coluna de níquel e então, dialisadas. Após o tratamento das células HEp-2 com 50 ug da proteína recombinante em diferentes tempos de indução, aquelas foram coradas com azul de toluidina 0,025% diluído em tampão McIlvaine pH 4,0 por 15 min e em seguida foi adicionado solução MgCl₂ 0,075M por 15 min (Metódo: concentração crítica de eletrólito – CEC). A subunidade β foi clonada e expressada em E. coli BL21. Através do método CEC foi possível observar apoptose em células tratadas com a proteína recombinante, porém como esta metodologia é apenas um indicativo de apoptose, outros ensaios serão necessários para quantificá-la. Como o número de casos de câncer aumenta a cada ano e os tratamentos existentes para esta doença não são específicos, pesquisas para novas terapias contra o câncer são essenciais.