ANÁLISE DA ATIVIDADE E DA ORGANIZAÇÃO GENÉTICA RELATIVAS À SIMULANCINA 3299, UMA BACTERIOCINA ATIVA CONTRA PATÓGENOS ENVOLVIDOS EM MASTITE BOVINA

Karlla Fernanda Silva da Costa (UFRJ); Hilana Ceotto (UFRJ); Janaína dos Santos Nascimento (IFRJ); Ingolf F Nes (UMB); Maria do Carmo de Freire Bastos (UFRJ)

            A simulancina 3299 é uma bacteriocina identificada por nós, produzida pela estirpe Staphylococcus simulans 3299, isolada de gado com mastite bovina no Brasil. A purificação do peptídio, o seqüenciamento de ácidos aminados, experimentos de espectrometria de massa MALDI-TOF e a clonagem do gene estrutural da simulancina 3299 revelaram que ela é idêntica à nukacina ISK-1, um lantibiótico de 27 ácidos aminados, detectada em uma estirpe de Staphylococcus warneri isolada de "nukadoko" (produto de fermentação do arroz), no Japão. Em função dessa identidade, resolveu-se investigar se a simulancina 3299 e a nukacina ISK-1 teriam a mesma organização genética. Desse modo, foram realizadas amplificações de DNA, por PCR, das regiões intergênicas entre os genes envolvidos na biossíntese da simulancina 3299, para se comparar com a organização dos genes envolvidos na biossíntese da nukacina ISK-1. Para a realização de tal experimento, pares de oligonucleotídeos foram empregados. Dos sete fragmentos amplificados, seis produtos tiveram tamanhos correspondentes aos esperados, mas o produto da amplificação com os iniciadores ORF1 e nukAR foi maior (>1.300 pb) do que esperado (755 pb). Desse modo, esse fragmento foi clonado no vetor pGEM-T Easy e posteriormente seqüenciado, a fim de se comparar a sua seqüência com essa mesma região presente no plasmídio codificador da nukacina ISK-1. O sequenciamento da região entre os genes nukA e orf1 na estirpe de S. simulans 3299 revelou a presença de um elemento de transposição do tipo IS257 / IS431, que não está presente na estirpe de S. wasneri ISK-1 (produtora da nukacina ISK-1). O elemento IS encontrado neste trabalho: possui tamanho de 791 pb, sendo comum em outras estirpes bacterianas; pertence à família do elemento IS6; não apresenta sítio-alvo duplicado; sua porcentagem de G+C é de 33% e de A+T é de 67% e suas repetições invertidas, de 17 pb cada, apresentam uma substituição de base do tipo transição. Este elemento encontra-se inserido no referido plasmídeo, entre os genes orf1 e nukA, e o gene de transposase (675 pb) encontra-se na mesma direção destes genes. Também por PCR, definiu-se o local onde os determinantes genéticos da Bac são codificados. Assim, conclui-se que tais genes encontram-se em um plasmídeo de 25 kb presente na estirpe estudada, denominado pRJ97, a partir da amplificação usando-se amostra de DNA plasmidial.