AVALIAÇÃO DA EXPRESSÃO DIFERENCIAL DE GENES CODIFICADORES DE FATORES SIGMA DE CORYNEBACTERIUM PSEUDOTUBERCULOSIS EM RESPOSTA AO ESTRESSE OXIDATIVO

Thiago Luiz de Paula Castro (UFMG); Luis Gustavo Carvalho Pacheco (UFMG); Núbia Seyffert (UFMG); Fernanda Alves Dorella (UFMG); Anne Cybelle Pinto (UFMG); Pablo Matias Ribeiro de Oliveira Moraes (UFMG); Dayana Ribeiro (UFMG); Daniel Henrique Bücker (UFMG); Anderson Miyoshi (UFMG); Vasco Ariston de Carvalho Azevedo (UFMG)

Corynebacterium pseudotuberculosis é uma bactéria Gram-positiva, intracelular facultativa, causadora da linfadenite casosa, doença que acomete os pequenos ruminantes e causa grandes prejuízos para a ovinocaprinocultura mundial. Dentre os fatores de virulência relatados para essa bactéria se destacam a esfingomielinase fosfolipase D e as proteínas envolvidas na captação de ferro, elemento disponível em baixas quantidades dentro do hospedeiro. A capacidade de C. pseudotuberculosis persistir em fagolisossomos durante a infecção em macrófagos aponta para a presença de mecanismos sofisticados nessa bactéria para a adaptação ao estresse gerado pelo acúmulo de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio. Em resposta às condições ambientais adversas, como na presença de agentes oxidantes, os fatores sigma alternativos da RNA polimerase são ativados e desencadeiam a transcrição de genes responsáveis pelas modificações celulares necessárias à sobrevivência e até mesmo à virulência e patogenicidade do microrganismo. Nesse contexto, nosso grupo de pesquisa tem se dedicado ao estudo do papel dos fatores sigma alternativos de C. pseudotuberculosis na resposta ao estresse oxidativo gerado in vitro. A realização de curvas de crescimento nos permitiu identificar redução de cerca de 30% da viabilidade bacteriana quando são adicionados, a cultivos em fase de crescimento exponencial inicial (DO_600nm=0,2), peróxido de hidrogênio ou plumbagina às concentrações finais de 30mM e 15µM, respectivamente. Nos intervalos de 15, 60, 180 e 270 minutos após a adição desses agentes, nas concentrações supracitadas, foram isoladas alíquotas das culturas, das quais foi extraído RNA total. Os cDNAs gerados por transcrição reversa estão sendo submetidos à PCR em tempo real para a quantificação relativa de transcritos dos genes codificadores de fatores sigma e de genes codificadores de catalase, superóxido dismutase e de uma redutase de resíduos de metionina. A conclusão deste trabalho nos permitirá identificar os fatores sigma de C. pseudotuberculosis envolvidos na ativação de genes de resposta ao estresse oxidativo, criando perspectivas para a geração de uma linhagem viva atenuada vacinal com base na deleção de um gene codificador de sigma.
Suporte financeiro: FAPEMIG, CAPES, CNPq