ANÁLISE DA ESTRUTURA DE COMUNIDADE DE BACTÉRIAS CULTIVÁVEIS ASSOCIADAS A ESPONJAS MARINHAS POR PCR-RFLP

Juliana de Fátima Macedo Santos (UFRJ); Olinda Santos (UFRJ); Paula Pontes (UFRJ); Guilherme Muricy (MN-UFRJ); Marcia Giambiagi-demarval (UFRJ); Marinella Laport (UFRJ)

As esponjas marinhas são organismos bentônicos sésseis e filtradores, fontes de estruturas químicas que frequentemente apresentam atividade farmacológica. Em alguns casos, substâncias isoladas das esponjas se assemelham a metabólitos de origem microbiana, um indício de que micro-organismos associados podem ser os verdadeiros responsáveis por suas sínteses. Essas associações ocorrem de várias formas, com grande diversidade filogenética, compreendendo 40 a 60% da biomassa da esponja. Em estudos anteriores do nosso grupo, foram isoladas estirpes bacterianas produtoras de substâncias antimicrobianas a partir de espécies de esponjas coletadas na costa do Rio de Janeiro. Com o objetivo de analisar a diversidade de bactérias cultiváveis associadas às esponjas Arenosclera brasiliensis, Clathrina aurea, Geodia corticostylifera, Haliclona sp., Paraleucilla magna e Tedania ignis uma metodologia utilizando PCR-RFLP tem sido proposta. As esponjas foram coletadas no Arquipélago das Cagarras, na cidade do Rio de Janeiro e, logo a seguir, trituradas em água destilada estéril e o homogeneizado semeado em triplicata em três diferentes meios (BHI, Marine ou MArine em água do mar). As colônias crescidas foram analisadas diariamente por 7 dias quanto às características morfológicas e assim, um total de 125 UFC (unidades formadoras de colônias) foram isoladas e estocadas nos seus respectivos meios. Um par de iniciadores foi utilizado para amplificar, por PCR, uma sequência em torno de 1.490 pb do gene 16S rRNA. Em seguida, foi realizada a digestão dos produtos amplificados, com a endonuclease de restrição AluI, gerando fragmentos com padrões distintos de PCR-FLP. Entre 39 amostras bacterianas analisadas, foram observados, de acordo com os padrões de RFLP obtidos, 17 morfotipos diferentes, cujos representantes estão sendo identificados por sequenciamento. Resultados preliminares revelam a presença dos gêneros Bacillus, Brevibacillus, Virgibacillus, Shewanella, Pseudomonas e Pseudovibrio entre as amostras estudadas. Em relação ao gênero Bacillus, foi possível a diferenciação entre duas espécies: Bacillus cereus e Bacillus pumilus. Desta forma, observa-se que alvos moleculares podem prover uma alternativa para a identificação de bactérias associadas às esponjas, devido a sua especificidade e sensibilidade.