IDENTIFICAÇÃO DE ISOLADOS DE METARHIZIUM ANISOPLIAE AO NÍVEL DE VARIEDADE E CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR UTILIZANDO MARCADOR ITS-RFLP

Patricia Vieira Tiago (UFPE); Mariele Porto Carneiro-leão (UFPE); Neiva Tinti de Oliveira (UFPE); Elza Áurea de Luna Alves Lima (UFPE)

Metarhizium anisopliae (Metschnikoff) Sorokin é utilizado para combater a cigarrinha-da-raiz, Mahanarva fimbriolata Stal (Hemiptera: Cercopidae), que vem causando sérios danos à cultura da cana-de-açúcar nas regiões Sudeste, Centro-oeste e Nordeste do Brasil. A digestão de amostras de DNA com enzimas de restrição pode contribuir para a detecção de polimorfismo em fungos, com base no número e tamanho dos fragmentos produzidos. Os objetivos deste trabalho foram identificar isolados de M. anisopliae ao nível de variedade e verificar a variação genética entre estes isolados, utilizando o polimorfismo de fragmentos de restrição de produtos de amplificação da região ITS do DNA ribossomal (rDNA). Foram estudados 37 isolados de M. anisopliae obtidos de M. fimbriolata, no município de Tangará da Serra-MT. Foi utilizado como outgroup o isolado de Metarhizium anisopliae var. acridum CG291 Driver & Milner. Para identificação ao nível de variedade foi realizada uma PCR utilizando o iniciador específico ITSmet para M. anisopliae var. anisopliae. O estudo de polimorfismo foi baseado nas técnicas moleculares: ITS (Internal Transcrided Spacer) e ITS-RFLP (ITS - Restriction Fragment Length Polymorphism), utilizando oito enzimas de restrição. A amplificação da região ITSmet confirmou que os isolados são M. anisopliae var. anisopliae. O produto de amplificação do locus ITS1-5.8S-ITS2 do rDNA, utilizando os iniciadores ITS4 e ITS5 apresentou fragmento em torno de 600pb para os 37 isolados, sendo o mesmo observado para o isolado CG291. O fragmento amplificado de ITS não apresentou sítio de restrição para as enzimas DraI, PstI e AluI para todos os isolados de M. anisopliae var. anisopliae. As demais enzimas utilizadas (MspI, EcoRI, Bsh1236I, HaeIII e HinfI) geraram fragmentos monomórficos, não diferenciando os isolados de M. anisopliae var. anisopliae. O fragmento de ITS do isolado de M. anisopliae var. acridum CG291 apresentou um perfil de restrição que diferiu dos isolados de M. anisopliae var. anisopliae utilizando as enzimas AluI, EcoRI e HinfI. Não foi verificada uma variação genética entre os isolados de M. anisopliae var. anisopliae utilizando a técnica ITS-RFLP.