ANÁLISE DE UM NOVO MÉTODO DIAGNÓSTICO PARA DETECÇÃO DE CRYPTOCOCCUS NEOFORMANS EM AMOSTRAS DE LIQUIDO CEFALORRAQUIDIANO (LCR)

Thiely Rodrigues Ott (IPA); Stela Maris Bottin Gonçalves (FEPPS); Irina Marieta Becker (FEPPS); Livia Kmetzsch Rosa E Silva (UFRGS); Rúbia Denise Ruppenthal (IPA)

A criptococose é uma infecção fúngica que acomete o sistema nervoso central. Os agentes etiológicos da doença são as leveduras encapsuladas Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii. Para o diagnóstico da doença são utilizados métodos micológicos como os testes comerciais de aglutinação em látex e a cultura, que é atualmente considerada padrão-ouro no diagnóstico da criptococose. O objetivo principal deste trabalho foi desenvolver um novo método diagnóstico baseado em PCR utilizando a amostra clínica (líquido cefalorraquidiano - LCR) diretamente coletada do paciente. Oitenta e seis amostras de LCR foram submetidas à detecção por PCR, e os resultados foram comparados aos obtidos na cultura do fungo. Utilizamos a metodologia de PCR multiplex para identificação de C. neoformans e C. gattii, após a extração de DNA com o kit comercial RBC® (BioAmerica). Somente C. neoformans foi detectado entre as amostras analisadas. O novo método proposto apresenta sensibilidade e especificidade para a detecção de C. neoformans de 82% e 100%, respectivamente. Os valores preditivos positivos e negativos foram de 100% e 97%, respectivamente.  As análises micológicas (cultura, aglutinação, série bioquímica e teste direto) levavam em média para liberação de um resultado positivo entre cinco (5) e sete (7) dias. Os tempos estimados para a extração e PCR do fungo cultivado são de aproximadamente quatro (4) dias e o tempo para a realização da extração e PCR da amostra clínica dois (2) dias. Nossos resultados apontam que a PCR pode ser empregada no diagnóstico de criptococose pela rapidez na liberação dos resultados. Os métodos micológicos são mais econômicos e de fácil manipulação, mas em contrapartida é necessário uma quantidade maior de material biológico para sua realização, sendo um método mais dispendioso. Os métodos de diagnóstico molecular são utilizados atualmente como uma complementação aos métodos tradicionais, sendo mais rápidos, porém mais onerosos. Além disso, há necessidade de um conhecimento técnico mais aprofundado para a detecção de fungos como C. neoformans e C. gattii em amostras clínicas.