Resumo

Introducción: La enfermedad de Crohn (EC) comprende un proceso inflamatorio crónico del tracto gastrointestinal. El origen de la enfermedad se desconoce, sin embargo existe evidencia que un desequilibrio en la microbiota intestinal estaría relacionado con el comienzo y la perpetuación de la enfermedad. Se ha asociado a Escherichia coli como parte de este desequilibrio. Al respecto, se ha visto que en pacientes con EC, cepas de E.coli son capaces de colonizar e invadir células epiteliales, atravesar la barrera intestinal humana e interactuar con los macrófagos y se han denominado E.coli Adherente-Invasiva (ECAI). Objetivo:Caracterizar la presencia de genes de virulencia y presencia de proteínas inmunogénicas en la membrana externa de aislados clínicos de ECAI de pacientes Chilenos con EC. Método: A partir de biopsias de pacientes, previamente tratadas con gentamicina, se procedió al aislamiento de cepas de E.coli , las cuales se estudiaron en relación a su capacidad de adherencia e invasión a células Caco-2, presencia de factores de virulencia mediante PCR, caracterización de sus perfiles de proteínas de membrana externa (PME), a diferentes temperaturas de cultivo, mediante SDS-PAGE 1D y reconocimiento de proteínas inmunogénicas mediante Western Blot (WB) utilizando sueros de pacientes con EC. Como referencia se utilizó la cepa NRG857c. Resultados: Se aisló E.coli en 9 de 17 pacientes con EC. Los aislados de E.coli fueron capaces de adherir e invadir cultivos de células Caco-2 hasta tres veces más que la cepa de referencia. Un único aislado de E.coli presentó genes de virulencia asociados a E.coli diarreogénicas (daaE), el resto presentó mayoritariamente factores de virulencia característicos de cepas patógenas extra-intestinales (ExPEC) tales como, fimH (9/9), papC(4/9), iucD(9/9). Los perfiles 1D de PME muestran un aumento en la expresión de bandas entre los 100KDa y 75KDa presentes a 37ºC y ausentes a 20ºC. Además, los ensayos de WB muestran reconocimiento de estas bandas por sueros de pacientes con EC y no por sueros controles. Discusión: Se logró aislar cepas de ECAI en un 53% de pacientes con EC y en un 6% en pacientes control. Estos aislados en su mayoría presentan factores de virulencia característicos de ExPEC, destacando la presencia del gen iucD que es parte de un operón relacionado con sistemas de captura de hierro. Una de las bandas de PME sobre expresada a 37ºC y reconocida por sueros de pacientes con EC coincidió con la proteína receptora de aerobactina, codificada en el mismo operón, el cual ha sido asociado con virulencia. Financiado: Proyecto Fondecyt 1120557, Beca Mecesup UCH0714