Resumo

Agrobacterium rhizogenes infecta plantas, notadamente dicotiledôneas, provocando um crescimento anormal de raízes, uma patogênese denominada “hairy roots”. A infecção por A. rhizogenes ocorre através da transferência de um segmento do plasmídeo Ri, denominado T-DNA para o genoma vegetal. Raízes transformadas via A. rhizogenes têm inúmeras aplicações biotecnológicas, tais como produção de fármacos, crescimento de microrganismos biotróficos e também estudo de genes expressos em raízes. No entanto, as agrobactérias apresentam baixa eficiência de transformação em gramíneas. Esse estudo teve por objetivo desenvolver um protocolo de transformação de milho (Hi II) por A. rhizogenes. Inicialmente, foi avaliada a diversidade genética de 16 estirpes de A. rhizogenes [(1) R1601; (2) 2659; (3) 8196; (4) A4; (5) CCT4821-1; (6) CCT4832-3; (7) CCT4842-4; (8) CCT4842-5; (9) A4-B; (10) 8196-B; (11) LBA; (12) A4-C; (13) 2659-B; (14) 15836; (15) 9402; (16) 1601-B] por REP-PCR, sendo selecionadas 4 estirpes que apresentavam maior distância filogenética. Embriões de milho foram tratados com acetosseringona e inoculados com A. rhizogenes. O plasmídeo pCambia 3301 contendo o gene repórter β-glucuronidase (gus) e fosfinotricina acetiltransferase (bar) foi utilizado para a seleção de transformantes. Após testes iniciais, foi selecionada a estirpe A. rhizogenes 8196 + pCambia 3301 e foram testadas três concentrações bacterianas (OD 550= 0,1; 0,3 e 0,9) e tempo (3 e 7 dias) de permanência em meio Co-cultivo (CcM). A taxa de crescimento das raízes foi quantificada aos 4, 11 e 21 dias após repicagem. Raízes com taxas de crescimento mais elevadas foram selecionadas para confirmação da transformação. Raízes com melhor desenvolvimento foram obtidas com 3 dias de incubação e OD 550 = 0,1. A expressão do gene gus foi transiente nos embriões e não foi detectada nas raízes. A confirmação por PCR dos genes bar, rol B, rol C e virD1 no genoma vegetal está em andamento. As raízes Ri T-DNA são facilmente cultivadas in vitro podendo contribuir para o entendimento da relação funcional de genes expressos nas raízes e a associação entre parasito-hospedeiro.