XXI ALAM
Resumo:1554-1


Poster (Painel)
1554-1Identificação de agentes de fungemia através da região ITS, utilizando a técnica de PCR-RFLP.
Autores:Diego Rayan Teixeira de Sousa (UEA - UNIVERSIDADE ESTADUAL DO AMAZONAS / FMT-HVD - FUNDAÇÃO DE MEDICINA TROPICAL DOUTOR HEITOR VIEIRA DOURADO / INPA - INSTITUTO DE PESQUISAS DA AMAZÔNIA) ; Mirlane Silva dos Santos (INPA - INSTITUTO DE PESQUISAS DA AMAZÔNIA / FMT-HVD - FUNDAÇÃO DE MEDICINA TROPICAL DOUTOR HEITOR VIEIRA DOURADO) ; Ana Carla Lima Freire (INPA - INSTITUTO DE PESQUISAS DA AMAZÔNIA) ; Marcelo Cordeiro dos Santos (FMT-HVD - FUNDAÇÃO DE MEDICINA TROPICAL DOUTOR HEITOR VIEIRA DOURADO / UEA - UNIVERSIDADE ESTADUAL DO AMAZONAS) ; João Vicente Braga de Souza (INPA - INSTITUTO DE PESQUISAS DA AMAZÔNIA)

Resumo

Introdução: Fungemia é a presença de fungos no sangue. Nos últimos anos, a incidência desse tipo de infecção se tornou uma das principais causas de morbidade e mortalidade em pacientes imunocomprometidos. As fungemias mais comuns em paciente com Aids são: criptococose e histoplasmose. Os diagnósticos através da microscopia direta e cultura, na maior parte dos casos, são lentos e apresentam problemas de sensibilidade e especificidade. Os métodos moleculares são úteis no diagnóstico, aumentando a sensibilidade, especificidade e velocidade no diagnóstico. O objetivo deste estudo foi avaliar a possibilidade de detectar e identificar agentes de fungemia através da região ITS, utilizando PCR-RFLP. Materiais e Métodos: A pesquisa utilizou 7 amostras de sangue da rotina laboratorial da Fundação de Medicina Tropical Dr. Heitor Vieira Dourado (FMT-HVD) e foi desenvolvida no Laboratório de Micologia do Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia (INPA). Extração do DNA: Inicialmente foi realizada a extração das amostras utilizando-se o kit de extração baseado na utilização de membranas (QIAamp Tissue and Blood, Qiagen, Germany). Reação de PCR: A reação teve um volume final de 25 µL consistindo de Tampão de PCR (10 mM TrisHCl, pH 8,3, 50 mM KCl), 1,5 mM MgCl2, 200 nM primers, 50 uM dNTPs, 1U amplitag DNA polimerase e 20 ng do DNA fúngico. As amostras foram levadas ao termociclador onde: após desnaturação inicial de 94 oC por 5 min, foram realizados 35 ciclos que consistirão de desnaturação do DNA 94oC por 30s, anelamento a 50oC por 30s e o extensão a 72 oC por 1 min, por fim foi realizada uma extensão final a 72 oC por 10 min. Digestão enzimática: Os produtos de PCR foram digeridos individualmente com 10 U da enzima de restrição Ddel, por 3 horas a 37 oC. Eletroforese: Os produtos de PCR digeridos foram analisados por eletroforese em gel de agarose 2% e corados por brometo de etidium. Foi utilizado como marcador de DNA Gene Ruler DNA ladder Mix (SM0331, St. LeonRot, Germany). Discussão dos Resultados: Foi obtido um perfil de polimorfismo distinto para cada espécie investigada: 550, 400 e 100 pb para Cryptococcus neoformans e 475, 425, 300 e 100 pb para Histoplasma capsulatum. Conclusão: Em conclusão, no presente estudo a técnica de PCR-RFLP foi capaz de detectar e identificar as duas principais espécies causadoras de fungemia em pacientes com Aids.


Palavras-chave:  Aids, Identificação, Fungemia, PCR-RFLP