Resumo

Escherichia coli enterotoxigénica (ETEC) es causa frecuente de diarrea acuosa en niños y viajeros a zonas endémicas. ETEC coloniza el intestino delgado utilizando diversas adhesinas y desencadena el cuadro de diarrea mediante la liberación de enterotoxinas termolábiles (LTs) y/o termoestables (STs). Actualmente, no hay una terapia efectiva para prevenir la diarrea ocasionada por ETEC, siendo uno de los principales obstáculos la diversidad de factores de virulencia que ellas portan. Estudios de caracterización han intentado identificar las adhesinas más frecuentes en cepas de ETEC de distintos orígenes geográficos, para utilizarlas como base en el desarrollo de vacunas que confieran una protección de amplio espectro. Sin embargo, entre un 15% y un 50% de las cepas resultan negativas en la detección de las adhesinas descritas. En nuestro laboratorio, como parte de una línea de investigación destinada a identificar nuevas adhesinas de ETEC, se estudió la cepa ETEC1766a (Serogrupo O4) obtenida a partir de un niño con diarrea en una población periférica de Santiago (Chile). ETEC1766a resultó negativa en la detección de las adhesinas, pero se adhiere a células Caco-2 en un nivel 8 veces mayor que la cepa prototipo ETECH10407, que porta 4 adhesinas distintas. Dentro de un banco de cósmidos construido en base al genoma de ETEC1766a, utilizando como hospedero la cepa no adherente E. coli HB101, se identificaron 3 clones que presentaron capacidad de adherencia (G10, G12 y G19). A partir de uno de estos clones, G12, se identificó recientemente el factor de colonización 23 (CS23) que determina en parte la capacidad de adherencia de ETEC1766a a células Caco-2. En el presente trabajo se describe la identificación de genes determinantes de la capacidad de adhesión del clon G10. Para ello, se realizó la inserción del transposón EZ-Tn5 y posteriormente, se seleccionaron los clones no adherentes producto de la inserción. El punto de inserción del transposón se identificó mediante secuenciación, encontrándose una secuencia homóloga (97% de identidad máxima con un 89% de cobertura) a genes de serín-proteasas autotransportadoras de Enterobacterias (SPATEs); dentro de la cual se han descrito adhesinas de cepas de E. coli. Estos resultados sugieren que la adherencia del clon G10 y, por lo tanto de ETEC1766a, estaría determinada al menos en parte por un integrante de la familia SPATEs. Financiado: Proyecto FONDECYT 1120809