XXI ALAM
Resumo:1128-1


Poster (Painel)
1128-1Participación del sistema de secreción tipo VI de Salmonella Typhimurium en la interacción con macrófagos murinos y aviares
Autores:Lorenzo Leiva Araya (UDECHILE - Universidad de Chile) ; Carlos Blondel Buijuy (UDECHILE - Universidad de Chile) ; Carlos Santiviago Cid (UDECHILE - Universidad de Chile) ; María Inés Contreras Osorio (UDECHILE - Universidad de Chile)

Resumo

Los sistemas de secreción tipo VI (T6SS) corresponden a un mecanismo de interacción célula-célula ampliamente distribuido entre bacterias Gram negativo. Aunque a este sistema se le han atribuido variadas funciones, el rol que cumple en la patogénesis de Salmonella aún no ha sido completamente aclarado. S. Typhimurium codifica un T6SS en la isla de patogenicidad SPI-6. Resultados obtenidos en el laboratorio indican que mutantes de este sistema generan un fenotipo atenuado en el modelo murino in vivo. En este trabajo se busca evidenciar la expresión, funcionalidad y contribución del T6SS durante la interacción de S. Typhimurium con componentes celulares del sistema inmune, etapa fundamental para el desarrollo de la infección sistémica. Para determinar la expresión del T6SS durante la infección de macrófagos, se construyó el vector pLZ01 que permite la generación de fusiones transcripcionales y traduccionales al reportero GFP en Salmonella. De esta manera, se fusionaron componentes estructurales del T6SS (VgrG, Hcp-1, Hcp-2) a GFP y se evaluó su producción en ensayos de infección in vitro mediante microscopía de fluorescencia. Para determinar la funcionalidad del T6SS, se estudió la translocación de VgrG al citoplasma de macrófagos a través de la observación de cambios en la fluorescencia del sustrato CCF2 causados por la proteína VgrG fusionada a &beta-lactamasa. Finalmente, se determinó la contribución del T6SS en la internalización y supervivencia en macrófagos a través de ensayos de protección con gentamicina. Todos los experimentos se realizaron en líneas de macrófagos murinos (RAW264.7) y aviares (HD11), utilizando cepas derivadas de S. Typhimurium 14028s. Los resultados mostraron que todos los componentes estructurales del T6SS estudiados se producen en el interior de macrófagos murinos y aviares durante la infección, sin embargo no se detectó translocación de VgrG al citoplasma de las células infectadas. Además, se observó que la presencia del T6SS no contribuye a la supervivencia al interior de macrófagos murinos ni aviares, aunque algunas mutantes del T6SS mostraron una mayor capacidad de internalización que la cepa silvestre. Estos resultados indican que el T6SS de S. Typhimurium se expresa durante la infección de macrófagos murinos y aviares. Además, el aumento en la capacidad de internalización de mutantes del T6SS indica que el sistema tendría un rol durante la infección de macrófagos.


Palavras-chave:  Expresión, Internalización, Macrófago, Salmonella, T6SS