Resumo

En la actualidad una de las limitaciones principales para la producción de bioetanol a partir de biomasa lignocelulósica es el costo de la producción de las enzimas celulolíticas capaces de convertir la lignocelulosa en azúcares fermentables. En este sentido, el objetivo de este trabajo es la búsqueda, identificación y caracterización de bacterias ambientales noveles con actividad celulolítica en ambientes naturales de nuestro país. Se estudió una muestra de suelo de bosque nativo de la región chaqueña, Argentina a partir del cual fueron identificados tres consorcios bacterianos (CH2, CH3 y CH4) con capacidad de hidrolizar celulosa, mediante un ensayo cualitativo de degradación en medio sólido. Los aislamientos que degradaron el sustrato celulósico carboximetil celulosa (CMC) fueron detectados por la formación de halos de aclaramiento que rodearon a las colonias luego de la tinción con rojo congo. Se observó halos de hidrólisis en los 3 consorcios bacterianos, el tamaño de los diámetros de los halos vario de 3,4 mm a 9,2 mm. Asimismo, se caracterizó la actividad β-1,4 endoglucanasa y celulasa total en los sobrenadantes de cultivo de todas las muestras y se realizaron ensayos de estabilidad térmica y de pH. La temperatura óptima de reacción fue de 50°C para CH2 y CH3 y 37°C para CH4. La actividad enzimática se observó en un rango de pHs de 4,0 a 8,0. Para caracterizar las celulasas se cultivó la muestra CH4 con avicel (celulosa microcristalina), la fracción de avicel se recuperó por centrifugación y se liberaron las enzimas adsorbidas mediante sonicación. El peso molecular de las celulasas fue determinado mediante un zimograma SDS-PAGE con CMC, se detectó la presencia de al menos una celulasa, de un peso molecular de entre 40 a 50 kDa. En este estudio se identificó y caracterizó la actividad celulolítica en consorcios bacterianos y se demostró que los mismos presentan enzimas celulolíticas. Si bien los géneros que constituyen los consorcios (Pseudomonas sp. y Achromobacter sp.) fueron descriptos previamente como celulolíticos y se están ampliando los estudios para permitir su correcta clasificación, es factible la descripción de especies noveles. La exploración de ambientes naturales posibilita la identificación de microorganismos con actividades enzimáticas útiles para la solución de distintas problemáticas ambientales, como lo son las fuentes de energía. Agencia de financiacion: INTA-EMBRAPA, PE141130 INTA