Resumo

Dermatofitoses ou tinhas são micoses causadas por um grupo de fungos conhecidos como dermatófitos, cujas espécies estão distribuídas nos gêneros Epidermophyton, Microsporum e Trichophyton. Os métodos laboratoriais convencionais de diagnóstico baseiam-se principalmente nas características morfológicas do fungo, e, nem sempre permitem uma clara definição do agente etiológico em nível de espécie, além de exigir um tempo relativamente longo e uma equipe técnica especializada para os estudos da macro e micromorfologia das colônias. Com os avanços nas técnicas de biologia molecular, tais como a reação em cadeia da Polimerase e tecnologias de seqüenciamento de DNA, as técnicas moleculares vem sendo aplicadas na identificação e diagnóstico das infecções fúngicas, entretanto, apesar da facilidade de amplificação de DNA, possível pela técnica de PCR, existe a necessidade de padronização dos protocolos a serem empregados em todas as fases dos procedimentos, desde a obtenção do ácido nucléico até a reação de amplificação propriamente dita, em especial considerando-se a grande variabilidade morfológica dos fungos. O objetivo deste estudo é avaliar diferentes procedimentos e suas variantes metodológicas empregados para o isolamento e recuperação de DNA de fungos dermatófitos.Foram avaliados diferentes procedimentos para a etapa de lise da parede celular e de recuperação de DNA de sete isolados de dermatófitos. Para a ruptura mecânica da parede célula fúngica, foram avaliadas seis estratégias, a partir da maceração do micélio mantido em diferentes temperaturas; da agitação vigorosa em vórtex com uma beads, digestão enzimática com proteinase K e nitrogênio líquido. Não houve diferenças significativas entre os procedimentos de lise da parede celular em termos de rendimento e grau de pureza do DNA obtido, entretanto, considerando a importância dos critérios de produtividade, tempo e facilidade de execução, a estratégia da agitação vigorosa do micélio em vórtex com pérolas de vidro, apresentou maiores vantagens metodológicas. Já na etapa de separação do DNA o método descrito por GUSTINCICH demonstrou maior simplicidade metodológica, sendo uma excelente alternativa para uso na rotina em substituição ao uso de kits comerciais.