XXI ALAM
Resumo:842-2


Poster (Painel)
842-2Diversidade molecular de bactérias diazotróficas recuperadas de solo utilizando milho como planta-isca
Autores:Karita Reis Costa (UEL - Universidade Estadual de Londrina) ; Danielle Cristina Ferreira (UEL - Universidade Estadual de Londrina) ; Karina Maria Lima Milani (UEL - Universidade Estadual de Londrina) ; Odair José Pais dos Santos (UEL - Universidade Estadual de Londrina) ; Matheus Afonso Schefer (UEL - Universidade Estadual de Londrina) ; André Luiz Martinez de Oliveira (UEL - Universidade Estadual de Londrina)

Resumo

Estudos sobre a diversidade microbiológica associada a plantas sadias de milho são de grande relevância para a elucidação da interação microrganismo-planta e por serem potencialmente vantajosos na promoção do crescimento vegetal. Este trabalho teve como objetivo a caracterização genética de 26 estirpes de bactérias diazotróficas isoladas da rizosfera de milho cultivado como planta-isca para a recuperação de isolados nativos do solo. Para a obtenção dos isolados, a camada superficial (0 – 5cm) de um solo de gramado foi coletada e diluída em areia esterilizada para o preenchimento de vasos que foram cultivados com plantas do híbrido de milho AG2040 por 60 dias. As plantas com maior teor de clorofila tiveram suas raízes lavadas e submetidas ao isolamento de bactérias diazotróficas em meios semi-seletivos (NFb, JNFb, LGI, LGI-P e JMV). Para a extração do DNA, as células foram crescidas em meio Dygs, centrifugadas e lavadas com solução salina estéril. Ao pellet foi adicionado 0,5mL de tampão CTAB 2%; 1μL de RNAse (20μg/mL); 0,5mL de clorofórmio:álcool isoamílico; 0,6V de isopropanol; 100μL de NaCl 5M e 400μL etanol absoluto; 1mL etanol 70%. A análise molecular foi realizada por BOX-PCR com o oligonucleotídeo iniciador BOX-A1R, tampão 10X (5μL), DNTP (2μL; 200μM de cada base), MgCl2 (6μL; 2,4mM), DNA Taq-Polimerase (0,3μL; 1,5U), DNA template (1μL; 50ng). Os resultados de fingerprinting obtidos pela técnica de BOX-PCR revelaram a presença de dois grupos clonais, sendo um formado por 8 isolados obtidos de plantas crescidas em diferentes diluições de solo e utilizando diferentes meios semi-sólidos de cultivo. O outro grupo clonal foi formado por 3 isolados obtidos de plantas crescidas em solo de gramado sem adição de areia (não diluído), a partir dos meios de cultivo JNFb e LGI. Os outros 15 isolados obtidos apresentaram um coeficiente de similaridade de Jaccard superior a 50%. Em conjunto, os resultados demonstram que o enriquecimento seletivo dos grupos bacterianos utilizando plantas de milho como armadilha fisiológica permitiu acessar 17 diferentes grupos genéticos de bactérias diazotróficas, das quais 4 aparentemente não possuem origem no ambiente de cultivo, tendo sido obtidas de plantas crescidas em areia esterilizada. A caracterização fenotípica dos isolados está em andamento, buscando identificar aqueles de maior potencial de promoção do crescimento vegetal.


Palavras-chave:  Bactérias diazotróficas, diversidade microbiológica, milho, promoção do crescimento vegetal