Resumo

Introdução: A leptospirose é uma zoonose causada por bactérias patogênicas do gênero Leptospira, que colonizam os túbulos renais de hospedeiros e são liberadas ao ambiente externo através da urina. Após a entrada no organismo, leptospiras patogênicas têm a capacidade de disseminar e desencadear uma resposta imune específica. Nosso grupo tem se concentrado na identificação de mecanismos de evasão ao sistema imune inato apresentados por estas bactérias. Recentemente, identificamos uma proteína de membrana externa de Leptospira, a qual denominamos LcpA, capaz de interagir com dois reguladores plasmáticos do sistema complemento humano: C4b Binding Protein (C4BP) e Fator H (FH). Objetivo: Neste trabalho realizamos a clonagem, expressão, purificação e caracterização de três fragmentos da proteína LcpA correspondentes às regiões N-terminal, intermediária e C-terminal tendo por objetivo mapear o domínio responsável pela interação com C4BP e FH. Métodos: Os fragmentos (apresentando overlapping) foram amplificados por PCR a partir do DNA da estirpe patogênica L. interrogans sorovar Copenhageni L1-130 e subclonados no vetor de expressão pAE. As proteínas recombinantes, dotadas de caudas de histidina, foram purificadas por cromatografia de afinidade a níquel. A interação com C4BP e FH foi avaliada por Western blot com sobreposição utilizando-se soro humano como fonte desses dois reguladores do sistema complemento. Resultados e discussão: Os três fragmentos da proteína LcpA foram devidamente expressos e purificados: Fragmento N-terminal com 10,04 kDa, Fragmento intermediário com 9,95 kDa e o Fragmento C-terminal com 9,58 kDa. Nossos dados de WB indicam que o fragmento C-terminal interage com C4BP e Fator H. Ensaios de desafio em modelo animal com este fragmento estão em andamento tendo por objetivo avaliar sua capacidade imunoprotetora. Financiamento: FAPESP (2009/01778-0) e CAPES