XXI ALAM
Resumo:692-1


Poster (Painel)
692-1Caracterización de la cepa reportera construida para estudiar el patosistema papa – Ralstonia solanacearum
Autores:Analía Sanabria (UDELAR - Catedra de Microbiología, Facultad de Química) ; Matías Salvo (UDELAR - Catedra de Microbiología, Facultad de Química) ; Saúl Burdman (HUJI - Department of Plant Pathology and Microbiology) ; María Julia Pianzzola (UDELAR - Catedra de Microbiología, Facultad de Química)

Resumo

Ralstonia solanacearum es una bacteria patógena de plantas que afecta a un amplio rango de cultivos como tomate, papa y berenjena, entre otros. En Uruguay incide principalmente en la producción de papa. El complejo diálogo patógeno – hospedero implica un primer paso de reconocimiento, seguido por la interacción del patógeno con el sistema de defensa de la planta, la adaptación a un nuevo ambiente y la colonización. Por mucho tiempo los estudios de los mecanismos de patogenicidad se llevaron a cabo bajo condiciones de laboratorio bien definidas. Estos estudios in vitro permitieron grandes avances; sin embargo los microorganismos establecen con su hospedero interacciones difíciles de reproducir en el laboratorio. En los últimos años se diseñaron nuevas estrategias con el objetivo de detectar genes de virulencia de la bacteria in vivo. Un ejemplo ha sido la técnica de RIVET (Recombinase-based In Vivo Expression Technology) que permite detectar promotores que son activados débil o transitoriamente durante el proceso de infección. Nuestro objetivo es identificar genes de R. solanacearum raza 3, biovar 2 que se expresan durante la infección con Solanum tuberosum, utilizando esta técnica. Brevemente, se construye una genoteca del patógeno empleando el vector pRIV, que posee la fusión de los genes resolvasa-uidA sin promotor. Esta biblioteca se introduce en una cepa reportera de R. solanacearum, mutada por inserción del casette res (res-KmR-sacB-res) en un gen neutro para la virulencia, sensible a la acción de la resolvasa. El pool de microorganismos resultantes se emplea para infectar a la papa. Si un promotor activado es clonado upstream a la fusión, su expresión inducirá la escisión del casette res, lo que puede ser seguido mediante genes marcadores. En este trabajo presentamos el proceso de obtención de la cepa reportera por inserción del casette res en R. solanacearum UY031 (raza 3, biovar 2) y la caracterización fenotípica (curva de crecimiento y evaluación de patogenicidad) y molecular (por PCR de la zona mutada y Southern Blot) de algunos de los clones transformantes obtenidos


Palavras-chave:  Ralstonia solanacearum, Solanum tuberosum, RIVET, murchera