Resumo

Introdução: Sabe-se que portadores assintomáticos de Mycobacterium tuberculosis apresentam bacilos sob forma latente no organismo, passíveis de reativação. Apesar de micobactérias serem consideradas não produtoras de esporos, estudos mostram evidências da provável formação de estruturas de dormência pelos representantes desse gênero. Assim, estudos são necessários para ampliarmos nosso conhecimento a respeito das propriedades biológicas dessas estruturas spore-like por micobactérias e de quais espécies são capazes de produzi-las e sob quais condições. Material e métodos: Inicialmente, um total de 19 cepas de micobactérias (16 cepas clínicas e ambientais e três ATCC) de 12 espécies diferentes foi submetido à seleção de estruturas spore-like, utilizando SDS e lisozima. Para visualização de estruturas spore-like, utilizou-se microscopia óptica e colorações de Gram, Ziehl-Neelsen e Wirtz-Conklin. Procedeu-se à verificação de heterogeneidade morfológica e de viabilidade celular da população bacteriana em resposta às diferentes etapas de processamento através de citometria de fluxo (CF) com marcação celular do tipo live/dead. Realizou-se vídeo-microscopia de contraste de fase objetivando-se a visualização das etapas de esporulação e germinação de uma cepa de M. nonchromogenicum. Quantificação de ácido dipicolínico (ADP) e microscopias eletrônicas de varredura (MEV) e transmissão (MET) estão em desenvolvimento. Resultados e discussão: Após seleção de spore-like, visualizaram-se estruturas ovaladas, apresentando pontos escuros em seus polos, com capacidade reduzida de serem coradas (“células fantasmas”). As mesmas apresentaram grande semelhança com esporos bacterianos clássicos e puderam ser encontradas a partir de 15 dias de incubação, antes e depois da seleção. A vídeo-microscopia possibilitou a visualização da formação de estruturas características de esporulação e germinação. CF, MEV, MET e quantificação de ADP estão em andamento. Conclusão: Micobactérias são capazes de formar estruturas semelhantes a esporos em resposta ao estresse ambiental. Prováveis etapas correspondentes à esporulação e à germinação puderam ser visualizadas sob vídeo-microscopia, durante as quais observaram-se diferentes subpopulações bacterianas através da CF. O presente trabalho verifica, de forma inédita, a produção de estruturas spore-like por micobactérias não causadoras de tuberculose (MNT). Instituição de Fomento: CNPq e CAPES.