Resumo

La coloración de Gram, tiene su importancia, en la taxonomía bacteriana y diagnóstico clínico y fue desarrollada por Hans Christian Gram en 1884. El mecanismo íntimo de la reacción de Gram, hasta hoy en día se desconoce, diversas investigaciones permitieron establecer tres teorías que explican el mecanismo de coloración del método de Gram, éstas atribuyen la reacción grampositiva a la existencia de una capa externa, llamada ectoplasma, presente sólo en grampositivos; a la permeabilidad de la pared y membrana celular y; al punto isoeléctrico del protoplasma celular y su afinidad por el colorante básico que se utiliza. El género <¡>Staphylococcus está integrado por cocos grampositivos, sin embargo, pueden observarse como gramvariables, una explicación precisa a esta doble reactividad no se ha establecido. El presente estudio plantea como hipótesis, que en la reacción de Gram, los componentes bacterianos coloreados con cristal violeta-iodo son los ácidos nucleicos, por lo que, el objetivo fue evaluar la asociación entre las características tintoriales obtenidas por la coloración de Gram con el contenido de ADN y ARN en <¡>Staphylococcus spp., mediante la degradación enzimática del ADN y ARN bacteriano. Se hizo el estudio del ciclo celular por microscopía óptica, a partir de cultivos sincronizados, elaborándose extendidos por quintuplicados a intervalos de cinco min por dos horas. Los extendidos se colorearon con Gram y DAPI antes y post-tratamiento con ADNasa y ARNasa; se aplicó la prueba de McNemar, para asociar la reactividad tintorial por Gram, antes y después del tratamiento enzimático, y la prueba de Pearson para establecer asociación entre la reactividad tintorial por Gram y DAPI, con un nivel de confianza del 95%. Durante el ciclo celular se observaron cocos grampositivos aislados, en pares y racimos. En las cepas evaluadas, post-tratamiento con ADNasa, se observó que en un alto porcentaje de los tiempos del ciclo celular, los cocos cambiaron de color morado a rosado. Post-tratamiento con ARNasa, los cocos permanecieron como grampositivos, cambiaron a gramnegativos o presentaron la doble tinción, encontrándose asociación estadísticamente significativa (p=0,0001) entre el color morado de las células grampositivas con el contenido de ADN y ARN. Asimismo, se obtuvo asociación estadísticamente significativa (p=0,0000) entre la tinción morada del Gram y fluorescencia intensa de la reacción de DAPI. Estos resultados sugieren que los ácidos nucleicos, son elementos que participan en el carácter grampositivo de cocos del género <¡>Staphylococcus.