XXI ALAM
Resumo:444-3


Poster (Painel)
444-3PCR Multiplex na rotina diagnóstica de tuberculose e micobacterioses
Autores:Fernanda Cristina dos Santos Simeão (IAL - Instituto Adolfo Lutz-Nucleo de Tuberculose e Micobacteriose) ; Romilda Aparecida Lemes (IAL - Instituto Adolfo Lutz-Nucleo de Tuberculose e Micobacteriose) ; Andreia Rodrigues de Souza (IAL - Instituto Adolfo Lutz-Nucleo de Tuberculose e Micobacteriose) ; Elisabete Aparecida de Almeida (IAL - Instituto Adolfo Lutz-Nucleo de Tuberculose e Micobacteriose) ; Lucilaine Ferrazoli (IAL - Instituto Adolfo Lutz-Nucleo de Tuberculose e Micobacteriose) ; Erica Chimara (IAL - Instituto Adolfo Lutz-Nucleo de Tuberculose e Micobacteriose)

Resumo

Introdução: A identificação rápida e precisa dos isolados de micobactérias é de grande importância na aplicação da terapêutica adequada. Muitos métodos de identificação têm sido estudados com intuito de diminuir o tempo entre o diagnóstico e o tratamento. Este trabalho avaliou a técnica de PCR multiplex como diagnóstico bacteriológico diferencial entre isolados do complexo Mycobacterium tuberculosis (MT) e micobactérias não tuberculosas (MNT) na rotina de um laboratório de referência. Material e métodos: Foram incluídos no estudo isolados de micobactérias recebidos consecutivamente pelo Núcleo de Tuberculose e Micobacterioses do Instituto Adolfo Lutz, no período de 20 de março a 03 de abril de 2012. Os isolados foram submetidos a análise microscópica com coloração por Ziehl Neelsen, identificação fenotípica convencional (TIP), identificação por PCR e análise de restrição de um fragmento do gene hsp65 (PRA) e PCR multiplex (MP). A MP foi feita utilizando os primers da técnica PRA juntamente com primers específicos para MT, baseados na sequência de inserção IS6110. A amplificação de dois fragmentos de DNA identifica um isolado como MT (hsp65 e IS6110) e apenas um fragmento (hsp65) como MNT. As amostras com perfil de MNT foram digeridas conforme o protocolo de PRA. Resultados: Foram analisados 147 isolados de micobactérias dos quais 127 foram identificados como MT e 18 como MNT pelo PRA e MP, com sensibilidade de 100% e especificidade de 90%. O MP identificou como MT quatro (2,7%) isolados dos quais dois apresentaram culturas mistas (MT+MNT), considerados resultados concordantes, e dois foram identificados como M. chelonae e M. lentiflavum pelo PRA. Para os isolados com cultura mista, a microscopia ou o crescimento em meio contendo ácido para-nitrobenzóico (PNB) indicou a presença de MNT. Conclusão: O MP é um método rápido, utilizando em média 5 horas para a liberação de resultado de MT. Possui a vantagem de identificar os isolados de MNT sem que seja necessário repetir a PCR para realizar o método PRA. Este é um método útil na rotina de laboratório devido a redução de custo e tempo na liberação do resultado. A limitação da técnica está na identificação de culturas mistas, mas a observação microscópica e a inoculação do isolado em meio contendo PNB pode solucionar a falha na detecção destas culturas.


Palavras-chave:  complexo Mycobactrium tuberculosis, micobacterias não tuberculosas, identificação, PCR multiplex