Resumo

Introducción. Dependiendo del gen phaC que codifica para la enzima PHA sintasa, los polihidroxialacanoatos (PHAs) pueden sintetizarse como homopolímeros o copolímeros. En un estudio anterior se aisló B. mycoides FLB2 capaz de sintetizar el copolímero P(HB-co-HV) únicamente a partir de glucosa. Para detectar el gen phaC clase IV en esta especie, fue necesario diseñar nuevos primers. Materiales y Métodos. Las cepas control Bacillus cereus BUN009 (+) y Escherichia coli BUN001 (-) fueron obtenidas del cepario de Microbiología de la Universidad de Nariño. Inicialmente se utilizaron los primers B1F, B1R y B2R con algunas modificaciones del protocolo de PCR. Luego, se diseñaron nuevos primers para B. mycoides tomando como referente la secuencia del gen phaC de B. weihenstephanensis, considerado filogenéticamente la especie más cercana a B. mycoides y se optimizó la PCR. Resultados y Discusión. Con B1F, B1R y B2R no se detectó el gen phaC clase IV en B. mycoides FLB2 posiblemente porque estos fueron diseñados sobre el gen phaC de B. megaterium, el cual no pertenece al grupo B. cereus. Los 4 nuevos primers diseñados fueron: FDM (Forward 5´ATGAGAACTGCAAAATCGGACGA3´), RNDM (Reverse 5´ CGAATAACGAGTTCACCCTTCAC3´), RDM2 (Reverse 5´GCTTCTACTTGACATGGCA3´) y RDM3 (Reverse 5´GAACGCTCTTCCAGCCAATTTC3´). Las condiciones de PCR fueron optimizadas empleando lisado bacteriano como templete de DNA evitando el uso de protocolos de extracción. Los nuevos primers se probaron in silico sobre la secuencia del gen phaC de B. mycoides DFC1 (GenBank HQ864320.1) y anillaron en posiciones similares del gen phaC de B. weihenstephanensis. Los primers FDM y RDM2 permitieron diferenciar el gen phaC clase IV en bacterias marinas hidrocarburoclásticas del género Bacillus relacionadas principalmente con B. simplex, B. subtilis y B. firmus (comunicación personal). Conclusión. B. mycoides, pertenece a un grupo bien diferenciado dentro del género Bacillus. El diseño de nuevos primers permitió amplificar fragmentos de 447 pb, 540 pb y 672 pb del gen phaC en B. mycoides FLB2 así como en otros miembros del género Bacillus. Se evidenció las variaciones propias del gen phaC en especies de un mismo género. Agradecimientos. VIPRI, Universidad de Nariño. Pasto-Colombia.