Resumo

S. pyogenes (SGA), apesar de universalmente sensível à penicilina in vitro, é citado pela literatura na ocorrência de falhas terapêuticas. Pela técnica de análise do perfil populacional (PAP) detectamos resistência fenotípica à penicilina em 211 amostras de SGA a partir de elevada densidade populacional (109-10UFC/ml), resistência que se mantinha em concentrações tão elevadas quanto 8microgramas/mL. Essas amostras foram isoladas de locais distantes geograficamente, em um período temporal de 20 anos, de portadores e de diferentes espécimes clínicos e apresentavam CMIs que as classificavam como sensíveis à penicilina. Neste estudo, utilizando a técnica de PAP, observamos que em alta concentração populacional SGA torna-se fenotipicamente resistente também à eritromicina. Devido à constância do fenômeno num grande e diversificado número de amostras, estudamos em duas destas se o fenômeno se repetia frente a outras drogas com mecanismos de ação diferentes e também frente ao BrEt. Observamos resistência fenotípica para todas as drogas testadas, apesar destas serem classificados como sensíveis pela CMI. A hipótese de que em alta densidade populacional um mecanismo de efluxo estivesse ativado nos levou a testar substâncias inibidoras de bombas de efluxo. Frente ao CCCP , observamos uma reversão do fenótipo para clindamicina e cloranfenicol, sugerindo que a expulsão desses antimicrobianos seria regulada por um mecanismo envolvendo bomba de efluxo. Frente à reserpina e ao DNP o fenótipo de resistência foi inalterado. Genes relacionados a bombas de efluxo e putativos foram detectados por PCR nas amostras estudadas. A possibilidade de que moléculas difusíveis oriundas do crescimento de 1010UFC/mL fossem responsáveis pela indução da expressão de resistência fenotípica foi avaliada; porém pela metodologia usada, a hipótese não foi comprovada. Comparando por abordagem proteômica a expressão de proteínas totais em S. pyogenes, demonstramos por SDS-PAGE um perfil proteico diferencial entre as duas condições. Através de espectrometria de massa (ESI-Q-TOF), foram identificadas 391 proteínas (142 comuns às duas condições; 132 e 117 detectadas somente em 107UFC/mL ou 1010UFC/mL, respectivamente). Análises pelo software Blast2Go mostraram características diferenciais das proteínas quanto a suas funções metabólicas e processos biológicos (presença de proteínas relacionadas a efluxo (ABC transporter), sinalização celular e proteínas reguladoras de virulência presentes apenas na condição de 1010UFC/mL). A morfologia celular foi avaliada por MEV e MET. Quando em alta densidade as células apresentavam parede celular mais espessa, com septação irregular.Por MEV, foi evidenciada em alta densidade celular uma estreita proximidade entre as células, o que facilitaria sinalizações. Esse mecanismo de resistência pode ter relevante significado clínico em situações onde uma elevada população celular se estabelece como em pacientes imunodeprimidos e usuários de imunossupressores.