Resumo

Segundo a Organização Mundial da Saúde, doenças infecciosas são a segunda principal causa de morte no mundo. Essas doenças são causadas por organismos patogênicos que podem compartilhar certas similaridades em seu modo de infecção. Bactérias patogênicas são responsáveis por diversas doenças de acometimento humano, sua patogenicidade, na maioria das vezes, apresenta-se associada a secreção de fatores de virulência que são responsáveis pela adesão, invasão e por danos ás células e tecidos do hospedeiro. P. aeruginosa é um patógeno oportunista, multiresistente a antibióticos podendo viver em materiais inertes e até soluções antisépticas, por isso é a bactéria Gram negativa principal causadora de infecções hospitalares, podendo levar à óbito por pneumonia e septcemia pacientes imunocomprometidos, principalmente pacientes com fibrose cística, AIDS e vítimas de queimadura. A proteína ExoU de P. aeruginosa é um fator de virulência, altamente citotóxico, secretado pela bactéria que apresenta atividade fosfolipase A, degradando a membrana celular e levando a rápida morte celular. ExoU é pertencente a família das proteínas tipo patatina, essas proteínas apresentam regiões homólogas a fosfolipase A2 citosólica humana e regiões homólogas a patatinas. A proteína homóloga PlpD é encontrada em linhagens de P. aeruginosa que não codificam para ExoU cromossomal. PlpD apresenta todas as regiões conservadas de proteínas bacterianas do tipo patatina. Além disso foi mostrado que seu domínio catalítico é secretado pela bactéria e apresenta atividade de lipase, importante no processo infectivo do patógeno. Como P. aeruginosa, assim como outros patógenos, se tornaram multiresistentes, a busca por novos alvos terapêuticos vem sendo incentivada. A compreensão estrutural dos componentes envolvidos no processo infectivo é essencial para o desenvolvimento de novos agentes terapêuticos. Em nosso trabalho o domínio catalítico do fator de virulência PlpD foi expresso em sistema heterólogo e purificado através de cromatografia de afinidade e exclusão molecular. Utilizando a técnica de difusão de vapor foram obtidos cristais dessa proteína que apresentaram difração em linha de luz síncroton, mostrando-se importantes ferramentas na obtenção da estrutura tridimensional desse importante fator de virulência. Além disso, ensaios de espalhamento de luz dinâmico, gel filtração analítica e cross-link utilizando-se glutaraldeído indicam que a proteína forme um homotrímero. FAPESP, CNPq.