Resumo

Introducão: As peptidases promovem a catálise de ligações peptídicas e representam um dos principais grupos de enzimas industriais. Este trabalho visa avaliar a produção de peptidase na fermentação em estado sólido (FES) pelo fungo Phialophora richardsiae utilizando farelo de trigo (FT) como substrato e a caracterização bioquímica parcial da peptidase contida no extrato bruto fermentado. Material e Métodos: A FES foi realizada em frascos de 250mL contendo de 5g FT (meio padrão) com variações dependentes do ensaio realizado. Foram estudadas as variações dos seguintes parâmetros: concentração de esporos, tipo e concentração de fonte de nitrogênio e temperatura. O extrato enzimático obtido pelo processo fermentativo sólido foi submetido ao fracionamento por etanol. A caracterização bioquímica da peptidase parcialmente purificada, realizada com o substrato azocaseína, avaliou o efeito de pH, temperatura, íons e inibidores. Discussão dos resultados: O primeiro parâmetro investigado foi a concentração de esporos e a melhor produção com níveis de 2800 U/g foi obtida após 120h com 1x10⁶esporos/g. O efeito de fonte de nitrogênio foi avaliado utilizando caseína e albumina. As melhores produções nos estudos de FT com caseína foram de 2800U/g nas condições FT e FT+0,25g caseína, após 96h de fermentação. A albumina em combinação com o FT não teve efeito indutor. A temperatura de produção que proporcionou maior nível de produção foi a 30ºC com 2800U/g em 120h. O extrato fracionado foi submetido à caracterização bioquímica. A peptidase possui condições ótimas de pH e temperatura de 7,5 e 50°C, respectivamente. A inibição por PMSF sugere a presença de uma serino peptidase e os ensaios na presença de íons mostrou que a atividade enzimática do extrato bruto foi reduzida na presença de Cu⁺² e Li⁺² e aumentada na presença de Ca⁺², Mn⁺² e Ba⁺². Conclusão: As melhores condições para a produção de peptidase pelo fungo Phialophora richardsiae são 1x10⁶ esporos/g de substrato, FT suplementado com 5% de caseína a 30°C. A caracterização bioquímica da peptidase parcialmente purificada mostrou que o pH e a temperatura ótimos foram 7,5 e 50°C, respectivamente. A inibição por PMSF sugere a presença da uma peptidase da classe serino. Além disso, na presença de Ca⁺² a atividade proteolítica apresentou um aumento de 16%.