Resumo

Introdução. Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) adere a células epiteliais no padrão de adesão localizada (AL). A principal adesina envolvida no fenótipo AL é a fímbria BFP (bundle-forming pilus) codificada no plasmídio pEAF (EPEC adherence factor). A EPEC é dividida em EPEC típica (tEPEC) e EPEC atípica (aEPEC), tendo por base a presença do plasmídio pEAF, que ocorre somente nas típicas. Curiosamente, em estudos epidemiológicos recentes, nosso grupo isolou amostras de aEPEC apresentando o padrão AL e plasmídios de alta massa molecular. O objetivo deste estudo foi investigar a relação destes plasmídios com o pEAF e avaliar a capacidade de transferência do fenótipo LA por transformação. Materiais e Métodos. As amostras de aEPEC A17, A60, A76, A92, A102, A104, A106 e A128 foram submetidas a extração de plasmídios, teste de sensibilidade a antimicrobianos, ensaios de PCR e Southern blot e experimentos de transformação. Resultados. A maioria das amostras estudadas apresentou pelo menos uma banda plasmidial com massa molecular entre 50 e 70 MDa, compatível com pEAF, sendo observado um plasmídio em comum presente nas amostras A60, A102, A128 e A76. Os experimentos de Southern blot e hibridização revelaram que as amostras A60 e A128 carregavam sequências homólogas ao gene bfpA. Ensaios de PCR confirmaram a presença do gene bfpA nas duas amostras. A seguir, foram realizados experimentos de transformação com as amostras A92, A102, A104 e A106, sendo obtidos transformantes apenas nas amostras A102 e A104. Os testes de adesão a células HEp-2 realizados com os transformantes obtidos mostraram que todos apresentavam o fenótipo AL. A eletroforese em gel de agarose mostrou a presença de um plasmídio de alta massa com padrão de migração semelhante nos transconjugantes e nas amostras doadoras. Pretendemos ainda obter novos transconjugantes com as amostras A17 e A76. Conclusão. Até o momento foram identificados dois plasmídios de massa molecular semelhante ao pEAF codificando simultaneamente o padrão de adesão AL e resistência a ampicilina. Ensaios de RFLP estão em andamento para verificar se existem sequências nucleotídicas comuns entre os dois plasmídios.