Resumo

Introdução:A emergência de resistência às polimixinas é extremamente preocupante, pois polimixinas têm sido utilizadas para o tratamento empírico de infecções graves. Há uma dificuldade na realização de testes de sensibilidade para polimixinas, pelos laboratórios de microbiologia clínica, uma vez que não existe ponto de corte definido pelo CLSI e também há discussão quanto à metodologia ideal para determinação das concentrações inibitórias mínimas (CIMs. Objetivo: Avaliar o impacto da adição de Tween80 ou congelamento prévio dos painéis de microdiluição para polimixina B nos resultados de CIM. Métodos: Foram analisadas 57 enterobactérias resistentes à polimixina B. As CIMs de polimixina B foram determinadas por microdiluição em caldo, conforme descrito no documento M7-A9 do CLSI, alterando-se três variáveis separadamente. Foram utilizados painéis com caldo Mueller Hinton cátion-ajustado adicionados ou não de Tween80 a 0,002%; preparados previamente e congelados a -80^oC por um mínimo de uma semana; preparados no dia da realização da microdiluição. Foi realizada PCR multiplex como uma triagem para a identificação dos genes codificadores de IMP, VIM, KPC e tipagem por ERIC-PCR. Resultados e discussão: Nos painéis sem adição de Tween80, as cepas E. coli ATCC 25922 e P. aeruginosa ATCC 27853 mostraram CIMs sempre próximas ao limite inferior aceitável, já ao se adicionar surfactante, as ATCCs apresentaram CIMs abaixo do limite aceitável. Dentre as 57 enterobactérias previamente selecionadas como resistentes à polimixina B, 41 delas tiveram essa resistência confirmada e dessas, 29 (70,7%) apresentaram CIMs para polimixina B >32mg/L, ao se utilizar painéis preparados no dia da realização da microdiluição e sem adição de Tween80. Em CIMs elevadas (≥16µg/mL), a adição do surfactante não interferiu no perfil de sensibilidade,porém, em CIMs próximas ao ponto de corte (≤4µg/mL), algumas cepas mudaram o perfil de resistente para sensível. Dentre as bactérias estudadas,15 cepas (26,3%) apresentaram o gene blaKPC. Foi observada uma alta diversidade genética entre as linhagens de K. pneumoniae e Enterobacter, o que indica que a diferença observada com o uso do Tween80 não tem relação com clonalidade. Conclusões: A adição do Tween80 reduz as CIMs de isolados com valores próximos ao ponto de corte podendo levar a mudança de categoria. Os painéis congelados a -80ºC apresentaram resultados equivalentes àqueles obtidos com painéis preparados no mesmo dia.