Resumo

A microbiota dos biofilmes dentários é determinada, em parte, por diversas interações ecológicas entre espécies bacterianas que colonizam os dentes. Estas envolvem interações antagônicas entre a espécie comensal Streptococcus sanguinis, colonizadores primários dos dentes e Streptococcus mutans, principal espécie envolvida na patogenia da cárie dental. Para inibir S. mutans, S. sanguinis produz H2O2 a partir da atividade da piruvato oxidase, codificada por spxB. Estudos preliminares indicam que spxB é regulado pelo sistema transcricional de dois componentes VicRK em S. sanguinis. O objetivo deste trabalho foi investigar o efeito da inativação de VicRK em S. sanguinis na capacidade desta espécie em inibir o crescimento de S. mutans in vitro. Foram utilizadas as cepas knockout de vicK (SKvic) construída a partir da cepa S. sanguinis SK36 por inserção de um cassete de resistência a eritromicina (erm) no gene vicK. Cepas S. sanguinis SK36 e S. mutans UA159 contendo plasmídeo auto-replicativo pVA838 com erm (SK36erm e UA159erm, respectivamente) foram utilizadas para os ensaios de competição. Para isto, 8uL de culturas overnight em BHI com 10&muug/mL de Erm (BHE) das cepas SK36erm e SKvic ajustadas a Abs550nm= 0.3, 0.5 e 0.7 foram inoculadas em placas de BHE e incubadas (37ºC, 10% CO2) por 6 h. Após incubação, 8uL da culturas overnight de UA159erm com absorbâncias ajustadas (A550nm= 0,2 e 0,3), foram inoculadas adjacente ao colonizador inicial. As placas foram incubadas overnight (37ºC, 10% CO2) e suas imagens obtidas utilizando Gel Logic 200 Imaging System Kodak sob parâmetros fixos de distância, tamanho e resolução. As imagens digitais foram analisadas com auxílio de Photoshop 6.0 para medição da área de inibição (mm). Três experimentos independentes foram realizados com 6 replicatas cada. Os ensaios de competição em meio sólido mostraram que a cepa de S. sanguinis SK36erm inibe aproximadamente 2 vezes mais (7.73+-0.28 mm) o crescimento de S. mutans UA159erm comparada com SKvic (4.58+-0.24 mm) (Mann-Whitney, p<0.05). A inativação do gene vicK diminui a capacidade de S. sangunis de inibir o crescimento de S. mutans in vitro.