Resumo

Staphylococcus aureus expressa em sua superfície uma proteína putativa transportadora de manganês nomeada como MntC. MntC está classificada como pertencente ao “cluster 9” de transportadores de metal e possui um possível papel de adesina. O objetivo desse trabalho foi obter a proteína MntC para realização de ensaios de caracterização estrutural, como dicroísmo circular e SAXS (do inglês small angle X-ray scattering), e ensaios de adesão a proteínas do hospedeiro, para verificar se esta possui papel de adesina, assim como estabelecer o seu melhor receptor. O gene codificador da proteína MntC foi amplificado por PCR, clonado no vetor pGEM e subclonado no vetor de expressão pRESET-C. O pRESET-C, vetor do tipo “alta cópia”, é constituído por uma sequência que codifica uma cauda de poli-histidina que funciona como um domínio de ligação a metal, estratégia utilizada para purificação, e uma sequência de reconhecimento e clivagem pela enteroquinase para retirada desta após purificada a proteína. Bactérias E. coli DE3 competentes foram transformadas com a construção pRESETC-mntc, a expressão foi feita pela adição de IPTG a cultura para uma concentração final de 1 mM por 3 horas de crescimento a 37°C. A proteína foi purificada a partir da fração solúvel do conteúdo celular utilizando cromatografia de afinidade com coluna carregada com níquel. A análise de expressão e purificação da proteína recombinante foi realizada por SDS-PAGE 12%. Pelo método de Bradford foi feita a quantificação da proteína purificada. A proteína MntC foi obtida em um bom nível de pureza com rendimento de aproximadamente 40 mg de proteína purificada por litro de cultura induzida. Paralelamente um trabalho de modelagem computacional com a MntC e outras 17 proteínas do “cluster 9” está sendo realizado para também se fazer uma caracterização estrutural destas. Modelagem comparativa foi realizada utilizando o software Modeller e proteínas homólogas com estrutura resolvida por métodos experimentais, o banco de dados utilizado para essa escolha foi o PDB-Protein Data Bank. A estrutura da MntC, assim como das outras proteínas estudadas, apresentou dois domínios globulares e a proximidade dos resíduos de ligação ao metal no interior da molécula. Outras análises estão sendo feitas para estabelecer o modo de movimento mais relevante e comparar o comportamento das proteínas da família colocando o metal no seu sítio de ligação ou deixando ausente.