Resumo

A microbiota intestinal humana é considerada como um órgão acessório, o qual desempenha um papel crucial na nutrição, metabolismo, desenvolvimento do epitélio intestinal, maturação do sistema imune, defesa contra patógenos e expressão gênica do hospedeiro. A diversidade microbiana é essencial para o funcionamento adequado deste “órgão microbiano” e mudanças em sua composição estão relacionadas à diversas desordens metabólicas e infecções, chamadas disbioses. Uma vez que o equilíbrio é perdido, a microbiota se altera levando a uma mudança na atividade metabólica bacteriana, e/ou a uma mudança na distribuição local dessas comunidades. Doenças diarréicas são a segunda principal causa de morte em crianças em todo o mundo, sendo os vírus entéricos responsáveis por cerca de 40% dos casos. Existem inúmeras possibilidades de causas de diarreia em crianças, onde as mais comuns estão relacionadas às viroses, tendo como principais agentes os rotavírus, os norovírus e os adenovirus entéricos. Diarréias induzidas por patógenos virais podem causar mudanças na composição da microbiota intestinal e destruição da barreira protetora microbiana, agravando a patologia. Sendo assim, o presente trabalho tem como objetivos avaliar o impacto da infecção por rotavírus humano sobre a microbiota intestinal utilizando um modelo de infecção em macacos cynomolgus. Acompanhar essa alteração ao longo do curso da infecção e identificar os membros da comunidade microbiana que foram alterados. Neste trabalho foram analisadas amostras de fezes de macacos cynomolgus infectados pelo rotavírus RV-A humano (cepa WA). Para realizar uma análise comparativa do impacto deste microrganismo sobre a microbiota intestinal dos macacos, foi extraído o DNA total das amostras, e amplificação por PCR utilizando primers específicos para região V3 do gene rrs bacteriano que codifica o ribossomo 16S. Os fragmentos amplificados foram separados por DGGE (Denaturing gradient gel electrophoresis) onde foram comparados os perfis das amostras estudadas. Nossos resultados demonstram uma clara alteração no padrão de bandas relacionadas ao período da infecção, indicando uma mudança na composição da microbiota bacteriana. Essas alterações apresentaram correlação positiva à carga viral, a qual foi acompanhada por q-PCR. A partir dos resultados obtidos os géis serão analisados pelo software BioNumerics e bandas de interesse serão selecionadas para o sequenciamento.