Resumo

Coleções de culturas microbianas constituem centros de conservação de recursos genéticos ex-situ, voltados à aquisição, preservação, caracterização, manutenção e distribuição de micro-organismos e células autenticadas. A qualidade de uma coleção fundamenta-se na garantia da conservação de seu material biológico, o qual constitui matéria-prima essencial para o avanço da biotecnologia. A preservação ideal por longos períodos deve evitar a contaminação, a perda de viabilidade e das características fisiológicas do material biológico. O congelamento a -80°C baseia-se na indução da dormência do micro-organismo e tem sido largamente empregado. Em geral, a taxa de viabilidade após até 5 anos de preservação é significativa. Dentre outras técnicas utilizadas, a Coleção Brasileira de Micro-organismos de Ambiente e Indústria – CBMAI, da UNICAMP, mantém seu acervo de fungos filamentosos, leveduras e bactérias por ultra-congelamento desde 2002. Este trabalho objetivou verificar a viabilidade de representantes destes grupos microbianos após preservação a -80°C em glicerol 10%, por um período de até 8 anos. Os táxons escolhidos foram Trichoderma spp., Saccharomyces cerevisiae e Streptomyces sp, os quais foram respectivamente reativados em Ágar Batata-Dextrose (BDA), Ágar Malte-Extrato de levedura (YMA) e Ágar glicose-extrato de levedura e malte (GYM) a 28ºC. Para as linhagens de fungo filamentoso a viabilidade foi verificada após incubação de 4-5 dias, assim como para as bactérias, e para as leveduras o tempo de incubação foi 48 horas. A metodologia de contagem para S. cerevisiae e Streptomyces sp. foi a de micro gota, utilizando-se 4 diluições. Os resultados de contagem celular da levedura e bactéria e a observação do crescimento micelial do fungo filamentoso demonstraram que a técnica de ultra-congelamento foi eficiente para os 3 gêneros estudados, mesmo após quase uma década de preservação. Há vários fatores importantes durante a preservação por esta técnica: o micro-organismo, a idade da cultura, a concentração celular inicial, o agente crioprotetor e as condições de estocagem. O sucesso da reativação das amostras estudadas indica que os procedimentos utilizados na CBMAI foram bem estabelecidos, o que pôde garantir a qualidade do material preservado por este período. Consideramos esta técnica de boa relação custo-benefício sendo indicada como alternativa satisfatória para preservação a longo prazo.