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| 2133-1 | Mecanismo de sinalização celular mediado por Bis-(3´-5´)-monofosfato de guanosina cíclico (c-di-GMP) participa da regulação de motilidade e formação de biofilme em amostras de Escherichia coli enteropatogênica atípica(aEPEC) | | Autores: | Higa, J.S. (IBU - Instituto Butantan - Laboratório de Genética) ; Carvalho, I.G.L (IBU - Instituto Butantan - Laboratório de Genética) ; Couto, S.C.F. (IBU - Instituto Butantan - Laboratório de Genética) ; Yang. M.J (IBU - Instituto Butantan - Laboratório de Genética) ; Culler, H.C. (IBU - Instituto Butantan - Laboratório de Genética) ; Ruiz, R.M. (IBU - Instituto Butantan - Laboratório de Genética) ; Bueris, V. (IBU - Instituto Butantan - Laboratório de Genética) ; Sircili, M.P. (IBU - Instituto Butantan - Laboratório de Genética) |
Resumo Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) é um dos agentes etiológicos de diarréia persistente em crianças. Amostras de EPEC tornaram-se os agentes bacterianos mais comuns em nosso meio, como causa de diarréia. A adesão em células epiteliais formando microcolônias é uma característica marcante de EPEC, possibilitando a formação de biofilme. Estes são associados à persistência bacteriana e a resistência a antimicrobianos. EPEC atípicas (aEPEC) de diversos padrões de adesão formam biofilmes em superfícies abióticas e em superfícies celulares. Recentemente, diversos estudos apresentam a Bis-(3´-5´)-monofosfato de guanosina cíclico (c-di-GMP) como outro importante mecanismo sinalizador envolvido na transição do estado planctônico para o estado de biofilme bacteriano. A proteína de ligação YcgR é um importante sítio de ligação de c-di-GMP e está envolvida diretamente na regulação do movimento flagelar através da ligação do complexo YcgR-c-di-GMP à proteínas do aparato flagelar, reduzindo a velocidade de batimento do flagelo. O objetivo do presente trabalho é avaliar a influência do gene ycgR na motilidade e formação de biofilme em amostra de aEPEC. A deleção do gene ycgR da amostra de aEPEC 320 (sorotipo O55:H7) realizada através da técnica de mutação por recombinação homóloga proposta por Datsenko e Wanner (2000); a formação de biofilme do mutante 320&DeltaycgR foi analisada através do teste colorimétrico de Cristal Violeta por períodos de 2 horas, 4 horas e 6 horas em meio LB e as absorbâncias mensuradas em espectrofotômetro no comprimento de onda de 595nm. O teste de motilidade foi realizado em placa de ágar 0,3% e o halo de crescimento foi medido após 6 horas de incubação à 37ºC. A análise dos resultados do teste de formação de biofilme demonstrou uma redução do biofilme no mutante 320&DeltaycgR quando comparado com a amostra selvagem em todos os períodos analisados. O fenótipo de motilidade também se mostrou reduzido na amostra mutante 320&DeltaycgR. Estes resultados sugerem que YcgR pode estar envolvido na regulação da formação de biofilme em amostra de aEPEC e corrobora dados da literatura que demonstram redução da motilidade em mutantes com deleção no gene ycgR.
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