Resumo

O fungo Cryptococcus neoformans é um patógeno oportunista que causa morbidade e mortalidade principalmente em pacientes imunocomprometidos. Muitos fatores de virulência contribuem para o estabelecimento da infecção por C. neoformans em mamíferos, dentre os quais podemos destacar a capacidade do fungo de crescer a 37°C, a presença de uma cápsula polissacarídica e a produção de melanina. Recentes estudos vêm apontando que a modulação da cromatina pode alterar a expressão de alguns desses fatores de virulência em C.neoformans. Nesse contexto, o objetivo deste trabalho foi estudar o efeito de moduladores epigenéticos na expressão de genes de virulência de C. neoformans e na interação do fungo com hospedeiros animais. Foram realizadas curvas de viabilidade para a linhagem H99 de C. neoformans empregando-se diferentes concentrações do inibidor de DNA metiltransferase 5-Azacitidina (5-Aza), e dos inibidores de histonas deacetilases, Tricostatina A (TSA) e Butirato de sódio (NaBut). Cultivando-se C. neoformans na presença de até 4 µM de 5-aZa não foi verificada alteração no crescimento e na expressão de fatores de virulência como cápsula e melanina. Entretanto, concentrações a partir de 10 µM de TSA e 10 mM de NaBut foram capazes de inibir significativamente o crescimento do fungo tanto a 30°C quanto a 37°C. As concentrações testadas das drogas apresentaram efeito fungistático, conforme verificado pelo ensaio de unidade formadora de colônias (UFC) e pelo uso do método colorimétrico XTT. Adicionalmente, leveduras crescidas em meios para indução da síntese de cápsula ou melanina na presença de TSA (3 µM a 10 µM) apresentaram uma diminuição significativa no tamanho da cápsula e na produção de melanina. Já em concentrações a partir de 5 mM de NaBut foi verificada a diminuição tanto do tamanho da cápsula quanto do corpo celular. Além disso, a produção de melanina foi inibida a partir de 10 mM de NaBut. Para avaliar se o efeito dessa droga é transmitido ao longo de gerações, leveduras previamente tratadas ou não com 10 mM de NaBut por 48 h foram lavadas e incubadas em meio próprio para indução de cápsula e melanina sem nova adição das drogas. Em paralelo foi realizada uma curva de sobrevivência de camundongos da linhagem Balb/C infectados intratraquealmente com 10⁵ leveduras previamente tratadas ou não (controle) com NaBut. Os resultados mostraram que a sobrevida dos camundongos foi de quatro semanas para ambos os grupos, e que a inibição da expressão dos fatores de virulência testados não é mantida após a retirada da droga nessas condições experimentais. Dessa forma, os resultados iniciais desse trabalho mostraram que moduladores epigenéticos são capazes de alterar a expressão de fatores de virulência em C. neoformans, embora seus efeitos pareçam não serem mantidos.