Resumo

Os Streptococcus agalactiae, também denominados estreptococcos do grupo B (EGB) são micro-organismos causadores de doenças como pneumonia, sepse e meningite, principalmente em neonatos e adultos imunocomprometidos. Os EGB são classificados em 10 sorotipos (Ia, Ib, II – IX), sendo os sorotipos III e V os mais prevalentes nas infecções em recém-nascidos e adultos imunocomprometidos, respectivamente. Para o desenvolvimento dessas infecções invasivas, é necessário que o EGB seja capaz de aderir à superfície endotelial, invadir e alcançar a corrente sanguínea. Estudos previamente realizados por nosso grupo demonstraram que durante as etapas de aderência e invasão de células endoteliais in vitro, os EGB induzem a reorganização dos filamentos de actina e fosforilação de proteínas em resíduos de tirosina. Entretanto, os mecanismos moleculares envolvidos no processo de aderência e invasão dos EGB na célula endotelial permanecem pouco conhecidos. Dados da literatura demonstram que a produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) pode inativar fosfatases, favorecendo assim a ativação de receptores tirosina quinase (RTK). Dentro deste contexto, nosso estudo teve como objetivo principal analisar o envolvimento da enzima NADPH oxidase, uma das principais enzimas produtoras de ROS, na interação EGB - célula endotelial da veia do cordão umbilical (HUVEC). O envolvimento da NADPH oxidase na interação EGB-HUVEC foi avaliada utilizando DPI e apocinina (inibidores de NADPH oxidase). Os filamentos de actina foram marcados com faloidina-FITC na presença ou ausência de DPI. Os níveis de p47^phox (subunidade da NADPH oxidase) foram avaliados por western blotting, e os níveis de produção de ROS durante a interação EGB-HUVEC foram avaliados através da utilização de sonda CM-H2DCFDA na presença e ausência de DPI e apocinina. Os dados obtidos neste trabalho demonstraram que tanto a invasão quanto a reorganização dos filamentos de actina induzidos por EGB nas HUVEC estão associados com a atividade da NADPH oxidase. Durante a interação EGB-HUVEC, os níveis de p47^phox aumentaram significativamente (1,3 vezes) e os EGB foram capazes de induzir a formação de ROS pelas HUVEC durante a interação, sendo esta produção de ROS reduzida na presença de DPI ou apocinina. Nossos dados sugerem o envolvimento da enzima NADPH oxidase na interação EGB-HUVEC e a capacidade dos EGB em induzir a formação de ROS pelas HUVEC.