Resumo

O processo brasileiro de produção de etanol impõe condições estressantes à levedura, sendo poucas as linhagens que conseguem suportar estes estresses com reciclo de células durante a safra. A Fermentação Extrativa a Vácuo é uma alternativa que minimizaria o estresse etanólico. No entanto em tal processo a levedura estaria submetida a um estresse osmótico mais acentuado devido à altas concentrações de componentes do mosto (sais, açúcares) e da própria fermentação (glicerol, ácidos orgânicos, etc.). Assim, o presente projeto buscou a obtenção de linhagens tolerantes às condições estressantes encontradas na fermentação extrativa, principalmente quanto à osmotolerância, tanto devido ao açúcar como aos componentes da vinhaça. Leveduras Saccharomyces cerevisiae pertencentes à coleção do Centro de Tecnologia Canavieira, totalizando 440 isolados, foram submetidas a um protocolo através do qual se pretendeu resgatar linhagens com as tolerâncias desejadas. As linhagens foram repartidas em 6 lotes, e submetidas a uma pressão seletiva mediante propagação em meios com teores crescentes de ART (10 a 20%) e vinhaça (13 a 74%). Ao final do processo, 15 colônias de cada lote foram isoladas (num total de 90 isolados) as quais foram genotipadas e identificadas como linhagens industriais (BG-1, CAT-1, PE-2 ou SA-1) ou indígenas. Os mesmos isolados foram avaliados individualmente mediante o crescimento (µmax e biomassa) em meio com 17,7% de ART e 74% de vinhaça, a 30ºC durante 24 horas, tendo-se como referência a linhagem CAT-1. A biomassa foi estimada pela absorbância a 600nm em leitora de microplacas. A genotipagem das 90 cepas isoladas evidenciou a presença dominante de linhagens indígenas e geneticamente distintas entre si. Destas, pelo menos 24 cepas se mostraram com perfil de tolerância, comparando com a referência, ressalta-se que dentre as 24 cepas, 3 apresentaram maior aumento de biomassa e 1 apresentou menor µmax. Em função da técnica empregada para destacar as linhagens tolerantes (cultivos sucessivos), é bem provável que juntamente com a seleção tenha igualmente ocorrido uma evolução adaptativa, na qual linhagens foram capazes de gerar uma descendência mais apta que os parentais. A utilização de meios com estresse osmótico gradual permitiu a seleção e/ou evolução adaptativa, sendo possível destacar pelo menos 4 linhagens com grande potencial para uma possível Fermentação Extrativa em escala industrial.