Resumo

Introdução Uma das principais doenças da cultura da cana-de-açúcar causada pela bactéria Leifsonia xyli subsp. xyli (Lxx) é o raquitismo da soqueira. Apesar de toda tecnologia envolvida no manejo da cultura, a redução da sua produtividade ainda é influenciada por vários fatores bióticos e abióticos. Deste modo, testes de diagnose devem incluir métodos que garantam a sanidade das plantas e o possível diagnóstico da doença em plantas assintomáticas, como a técnica de PCR tempo real. O PCR em tempo real, ao contrário do PCR específico, apresenta alta sensibilidade e maior rapidez além de permitir quantificar o patógeno em material vegetal com base na relação entre valores de Ct (cycle threshhold) e de quantidades conhecidas de massas de DNA do organismo alvo (D`HAENE et al., 2010). Materiais e Métodos Foram utilizadas duas variedades de cana-de-açúcar provenientes da região Nordeste. Seus DNAs foram extraídos segundo o método de MURRAY e THOMPSON, 1980. Para amplificação foram utilizados os conjuntos de primers Lxx202F e Lxx331R; Lxx82F e Lxx22R usados na plataforma Rotor – Gene Q Series Software 2.0.2. As condições de amplificação foram: uma etapa inicial a 95 °C durante 5 minutos, seguido por 50 ciclos de desnaturação do DNA a 95 °C durante 10 segundos, e anelamentos de 60 e 63 °C durante 30 segundos e 72°C por 30 segundos para extensão da fita de DNA. A análise da curva de melting foi realizada na faixa de temperatura de 55 – 95°C. Discussão dos resultados Os resultados obtidos com as variedades testadas foram positivos para o patógeno utilizando os primers específicos para PCR tempo Real, observados através da curva de dissociação (curva de melting). A análise das curvas de dissociação derivadas dos conjuntos de primers Lxx202F e Lxx331R e Lxx82F e Lxx22R confirmaram as temperaturas de melting esperadas pelos amplicons de 87°C e 86°C para diagnóstico do raquitismo da soqueira como descritos na literatura para uso em PCR tempo real. Grisham et al., (2007) adaptaram esta técnica para quantificação precoce L. xyli subsp. xyli (Lxx) em tecidos de folha de três variedades inoculadas ou não de cana–de–açúcar e com diferentes graus de resistência a Lxx com base em primers desenhados a partir da região ITS do rDNA. O método detectou a bactéria em plantas de cana-de-açúcar a partir de três meses após a sua inoculação. Conclusão A técnica mostrou-se sensível em detectar de maneira segura e reprodutível o raquitismo da soqueira.