Resumo

O controle higiênico-sanitário de alimentos é uma das grandes preocupações de Saúde Pública. Dentre os patógenos de origem alimentar, destaca-se a Listeria monocytogenes, pela severidade dos quadros de enfermidade e pela alta taxa de mortalidade detectada em suas infecções. No Brasil a RDC nº12/2001, estabelece L. monocytogenes como parâmetro para a avaliação de queijos de média a alta umidade. A ISO/IEC 17025 tem sido a norma da garantia da qualidade mais utilizada em laboratórios de ensaios que executam o controle microbiológico de alimentos. Um requisito da norma é a participação do laboratório em ensaios de proficiência (EP). O objetivo deste estudo foi desenvolver metodologia para produção de dois lotes de materiais de referência (MR), um contendo L. monocytogenes e outro Listeria innocua, para a avaliação da sensibilidade e da especificidade da técnica aplicada. Para utilização destes lotes, uma matriz de alimento livre de contaminação por L. monocytogenes deverá ser enviada juntamente com os MR para realização do ensaio. Para o preparo dos lotes foram utilizadas cepas de L. monocytogenes e L. innocua isoladas de amostras de frango cru. As cepas foram cultivadas em caldo tripticaseína de soja contedo 0,6% de extrato de levedura. As concentrações das células foram ajustadas em aparelho fotocolorímetro e averiguadas por plaqueamento. As suspensões de células foram diluídas em salina peptonada contendo 100mM de sacarore até a concentração alvo. Volumes de 1,0 mL da suspensão de cada um dos lotes foram distribuídos em frascos. Os frascos foram congelados a ≤-70ºC e submetidos à liofilização. Posteriormente, os frascos foram selados, rotulados e estocados a ≤-70°C. Para o controle dos lotes foram realizados os testes de homogeneidade e de estabilidade nas temperaturas de estoque durante 6 meses (-20 e ≤-70ºC) e em três temperaturas simulando condições de transportes durante quatro dias (4, 30 e 35ºC). Para as análises de controle, foi utilizado o plaqueamento direto em ágar tripticaseina de soja contendo 0,6% de extrato de levedura. Para a avaliação estatística da homogeneidade foi aplicada a análise de variância, segundo o Protocolo Harmonizado e para os testes de estabilidade a análise de regressão linear, seguindo as orientações da ISO GUIA 35:2012. Os dois lotes preparados foram considerados homogêneos e estáveis para os critérios avaliados, estando em condições adequadas para a utilização em um EP.