Resumo

O objetivo deste trabalho foi estudar as enzimas extracelulares de micro-organismos isolados da Antártica. As amostras bacterianas foram coletadas de solo das pinguineiras e isoladas em meio LB (triptona 1%; extrato de levedura 0,5%; NaCl 1% e agar 2%) . Seis amostras foram isoladas e denominadas com os códigos AP3, AP8, AP24, AP31, AP59 e AP67. A temperatura ótima de crescimento foi determinada usando 3 temperaturas diferentes: 4ºC, 37ºC e a temperatura ambiente (28 – 30 ºC), A temperatura ótima foi a temperatura ambiente onde os micro-organismos cresceram em 48 horas. A 4ºC o crescimento ótimo foi alcançado com 7 dias e na estufa não houve crescimento. Após esta etapa inoculamos as amostras, separadamente, em erlenmeyers contendo 50 ml de meio extrato de levedura líquido (extrato de levedura 0,5%, peptona 0,5%, KCl 2,0% e sacarose 2,0%), e incubamos por 48 horas com agitação de 400rpm no shaker a temperatura ambiente, visando o aumento da biomassa. Após este tempo 10 ml dos meios foram retirados e centrifugados em tubos Falcon estéreis à 4000 rpm por 15 minutos. Em seguida as células foram lavadas duas vezes e o pellet ressuspendido em 500 μl de salina estéril. O método usado para verificar a presença das enzimas foi o de detecção qualitativa em placas de Petri com Agar suplementado com diferentes substratos, com poços centrais. 100 μl da suspensão celular foi inoculada em cada poço da placa que continha o substrato a ser testado (amido, celulose, caseína e gelatina), sendo um poço o controle negativo. Após a inoculação, os meios foram incubados por 48 horas e as placas coradas com os respectivos corantes: 1- coomassie blue nas placas de Agar gelatina (NaCl 0,85%; extrato de levedura 0,1%; gelatina 1% e Agar 2%), 2- solução lugol nas placas de Agar amido (NaCl 0,85%; extrato de levedura 0,1%; amido 2% e Agar 2%) e Agar celulose(NaCl 0,85%; extrato de levedura 0,1%; carboximetilcelulose 0,2%e Agar 2%) e preto de amido nas placas de Agar caseína(NaCl 0,85%; extrato de levedura 0,1%; leite em pó desnatado 1% e Agar 2%). Os resultados foram visualizados pela formação de halos devido a degradação dos substratos incorporados. As amostras AP8 e AP24 foram as únicas que apresentaram a enzima amilase, as amostras AP3, AP8, AP24, AP31 e AP67 apresentaram a enzima gelatinase, apenas a amostra AP67 apresentou a enzima celulase e as amostras Ap8, AP24, AP31 e AP67 apresentaram a enzima caseinase.